典型文献
关岭牛IGF1基因干扰载体构建及其对成肌细胞的影响
文献摘要：
胰岛素样生长因子1(insulin like growth factor 1,IGF1)是通过调控骨骼肌蛋白的合成影响肌肉发育的单链多肽类激素,对细胞增殖等多种生理功能具有重要作用,本研究旨在探究IGF1基因对关岭牛(Bos taurus)成肌细胞的影响.选用健康的成年(2～3岁)关岭牛3头,采集心、肝、脾、肺、肾、前腿肌、后腿肌、背最长肌、斜方肌、臀肌、胃、小肠12个组织样提取RNA,采集背最长肌组织成功培养关岭牛成肌细胞.运用qPCR技术检测IGF1基因在不同组织中的相对表达量;运用在线软件对关岭牛IGF1蛋白质理化性质、二级结构和三级结构、亚细胞定位进行分析;同时通过在线软件设计IGF1基因的3对短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰序列和1对阴性对照序列,与pGPU6-GFP-Neo载体连接后进行测序,将构建成功的IGF1基因干扰载体转染至成肌细胞;运用qPCR技术检测并筛选出干扰效率最高的干扰载体,分析该干扰载体对IGF1基因表达的影响;运用qPCR技术检测干扰IGF1基因对细胞增殖相关基因细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖性激酶2(cyclin-dependent kinases 2,CDK2)的相对表达量影响;运用CCK8(Cell Counting Kit-8)法检测成肌细胞增殖情况.结果表明,IGF1基因在关岭牛心、前腿肌、后腿肌、背最长肌、斜方肌、臀肌等12个组织样中均有表达,在肝中相对表达量最高,极显著高于其他组织(P<0.01);在培养关岭牛成肌细胞的基础上,成功构建关岭牛IGF1基因干扰载体,并筛选出shRNA-IGF1-1干扰效率最高(P<0.01);IGF1蛋白的分子式为C744H1186N214O216S15,相对分子质量为17.06581 kD,理论等电点为9.36,属碱性不稳定蛋白;IGF1基因被抑制后,细胞增殖相关基因cyclin D1和CDK2的表达量均极显著低于shRNA-NC(P<0.01).CCK8法检测细胞增殖结果表明,IGF1基因被抑制后,在24和72 h成肌细胞增殖均显著低于对照组(P<0.05),48 h为极显著水平(P<0.01),表明体外沉默IGF1基因后,会影响成肌细胞增殖能力和抑制成肌细胞增殖相关基因表达.本研究为进一步研究IGF1基因对关岭牛肌肉生长发育的作用及调控机制提供了基础数据.
文献关键词：
关岭牛;胰岛素样生长因子1(IGF1);RNA干扰;成肌细胞;细胞增殖
中图分类号：
作者姓名：
宋林锦;许厚强;李永;孙金魁
作者机构：
贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室/贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室,贵阳550025;贵州大学动物科学学院,贵阳550025;贵州大学生命科学学院,贵阳550025
文献出处：
引用格式：
[1]宋林锦;许厚强;李永;孙金魁-.关岭牛IGF1基因干扰载体构建及其对成肌细胞的影响)[J].农业生物技术学报,2022(05):896-907
A类：
C744H1186N214O216S15
B类：
关岭牛,IGF1,基因干扰,干扰载体,载体构建,成肌细胞,胰岛素样生长因子,insulin,like,growth,骨骼肌,肌蛋白,肌肉发育,单链,多肽,肽类,生理功能,Bos,taurus,腿肌,后腿,背最长肌,斜方肌,臀肌,小肠,肌组织,织成,qPCR,不同组织,相对表达量,二级结构,三级结构,亚细胞定位,软件设计,短发,发夹,short,hairpin,shRNA,pGPU6,GFP,Neo,转染,D1,cyclin,细胞周期蛋白依赖性激酶,dependent,kinases,CDK2,CCK8,Cell,Counting,Kit,牛心,他组织,分子式,相对分子质量,kD,等电点,NC,显著水平,明体,响成,细胞增殖能力,相关基因表达,肌肉生长发育,调控机制
AB值：
0.290525
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