旨在分析miR-138在耗牛前体脂肪细胞分化过程中的调控作用.本研究设计合成miR-138 mimics和in-hibitor 以对细胞进行miR-138过表达及抑制表达,并通过油红O染色分析miR-138对耗牛肌内前体脂肪细胞脂质沉积的影响;利用CCK-8、划痕和流式细胞技术分析miR-138对细胞增殖的影响;通过对bta-miR-138进行生物信息学分析,筛选其在脂质沉积过程中的相关潜在靶基因;利用RT-qPCR测定miR-138潜在靶基因mRNA表达水平,并通过双荧光素酶报告试验确定靶向关系.结果显示,过表达miR-138后,细胞内脂滴沉积水平显著低于对照(NC)组(P＜0.01),而抑制miR-138表达则显著增强脂肪细胞脂质沉积(P＜0.01);RT-qPCR结果表明,过表达miR-138可显著抑制脂肪分化标志基因PPARy和c/EBPα的表达(P＜0.01),抑制miR-138则上调PPARγ和c/EBPα表达水平(P＜0.05);此外,过表达miR-138后,潜在靶基因PTPN11、CREB1和ADCYAP1R1表达水平显著下调(P＜0.05),而PGC-1α和SNAP25表达极显著下调(P＜0.01);抑制miR-138后MXLIP和SNAP25表达显著上调(P＜0.05),PGC-1α和PTPN11表达极显著上调(P＜0.01);CCK-8和划痕试验结果表明,过表达miR-138后24～36 h,细胞增殖活性显著低于对照组(P＜0.05),而抑制miR-138则表现为细胞增殖活性增强;流式分析结果显示过表达miR-138后,细胞出现G1-S期阻滞,细胞周期相关基因CCND1、CCNB1和增殖标志基因Ki67的mRNA表达显著降低;生物信息学分析预测获得263个miR-138公共靶基因,KEGG富集结果显示靶基因主要参与"轴突导引"、"胰岛素抵抗"、"胰岛素分泌"及"RNA降解"等通路,GO 分析主要富集于"RNA聚合酶Ⅱ启动子对转录的正向调控"、"核染色质"、"染色质DNA结合"和"I型肺细胞分化"等功能;双荧光素酶报告试验结果显示,共转染miR-138 mimics和PGC-1α-Wt-PGL3-basic可显著降低细胞荧光强度(P＜0.01).以上结果表明,miR-138可通过靶向结合PGC-1α 3'UTR序列,降低PGC-1α的mRNA表达水平,抑制耗牛肌内前体脂肪细胞分化和脂质沉积,降低细胞增殖活性.本研究为阐明牦牛肉质性状的潜在分子机制提供参考.

耗牛;miR-138;PGC-1α;前体脂肪细胞;增殖分化

冉宏标;王会;柴志欣;王嘉博;张明;蔡欣;钟金城

西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省/教育部重点实验室,成都610041;西南民族大学青藏高原研究院,成都610041

畜牧兽医学报

[1]冉宏标;王会;柴志欣;王嘉博;张明;蔡欣;钟金城-.miR-138靶向PGC-1α调控牦牛肌内前体脂肪细胞增殖及分化)[J].畜牧兽医学报,2022(10):3434-3447

ADCYAP1R1,MXLIP,PGL3

miR,PGC,肌内前体脂肪细胞,耗牛,脂肪细胞分化,设计合成,mimics,hibitor,过表达,制表,过油,染色分析,脂质沉积,CCK,流式细胞技术,bta,生物信息学分析,沉积过程,靶基因,qPCR,双荧光素酶,内脂,脂滴,沉积水,NC,脂肪分化,标志基因,PPARy,EBP,PTPN11,CREB1,SNAP25,划痕试验,细胞增殖活性,流式分析,G1,细胞周期,CCND1,CCNB1,Ki67,分析预测,集结,轴突,导引,胰岛素抵抗,胰岛素分泌,启动子,染色质,共转染,Wt,basic,荧光强度,UTR,牦牛肉,肉质性状,增殖分化

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