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犬黑皮质素受体-4突变体D298N真核表达载体的构建及其在MDCK细胞中的表达
文献摘要：
[目的]引进犬MC4R突变点,构建突变体D298N表达载体并在MDCK细胞中获得表达.[方法]设计带突变点D298N引物,以犬MC4R基因组DNA为模板,采用普通PCR和Overlap-PCR扩增编码区,将产物克隆、酶切、测序鉴定.将测序正确的基因连接到pcD?NA3.1-myc-His/A载体上,将重组体pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R-D298N酶切、鉴定,将测序正确的重组体转染到MDCK细胞中,继续培养3 d,提取细胞总RNA,并采用RT-PCR方法检测基因表达.提取细胞总蛋白,Western Blot鉴定蛋白表达.[结果]构建带D298N突变点的真核表达载体,提取质粒后有2处碱基不同,分别是777位碱基T→C,892位碱基G→A(引入的突变位点).转染到MDCK后,RT-PCR和Western Blot均检测到重组体在基因水平和蛋白水平的表达.[结论]成功构建犬的重组体真核表达载体并在MDCK细胞中表达.
文献关键词：
犬;黑皮质素受体-4;真核表达载体;定点诱变;D298N;MDCK细胞
中图分类号：
作者姓名：
宋立先;刘春红;王占青;高蓉;徐学振
作者机构：
滨州医学院烟台附院,山东烟台264100
文献出处：
引用格式：
[1]宋立先;刘春红;王占青;高蓉;徐学振-.犬黑皮质素受体-4突变体D298N真核表达载体的构建及其在MDCK细胞中的表达)[J].安徽农业科学,2022(20):76-80
A类：
D298N,cMC4R
B类：
黑皮,皮质素,突变体,真核表达载体,MDCK,变点,引物,Overlap,增编,编码区,接到,myc,His,重组体,pcDNA3,转染,总蛋白,Blot,质粒,碱基,突变位点,基因水平,定点诱变
AB值：
0.223253
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