典型文献
利用CRISPR/Cas9技术定向编辑水稻OsIQD1基因
文献摘要：
[目的]植物特异性IQD家族蛋白质是一类植物特有的钙调素结合靶蛋白,在植物的生物防御和发育调节中发挥重要作用.前期酵母双杂筛选试验表明,Pik-H4与OsIQD1存在互作关系,为进一步揭示OsIQD1在水稻抗稻瘟病中的生物学功能,利用CRISPR/Cas9编辑技术对OsIQD1基因进行定点编辑.[方法]通过序列比对获得水稻OsIQD1.在OsIQD1第1外显子和第5外显子(DUF4005结构域)区域设计2个20 bp的编辑靶点,将2个靶点核苷酸片段克隆至pRGEB32载体,获得pRGEB32-OsIQD1-gRNA载体,利用农杆菌介导法转化水稻Pik-H4 NIL愈伤组织,经再生培养、潮霉素检测获得转基因阳性植株,并对T0代转基因植株靶点区域序列进行PCR和测序,分析osiqd1的突变类型.[结果]转基因再生植株经过对抗潮霉素基因HPTⅡ的PCR鉴定,获得30株阳性株系.对T0代植株靶点附近序列的测序结果表明,OsIQD1基因被成功编辑,两个位点的编辑效率分别为21.67％和26.67％,其中,靶点2区域有1个纯合突变株系.[结论]研究结果为进一步利用osiqd1突变体开展其参与钙离子/钙调素信号转导通路的机制研究提供了遗传材料,初步推定OsIQD1参与植物的基础免疫反应.
文献关键词：
水稻;钙调素结合蛋白;OsIQD1;CRISPR/Cas9;基因编辑
中图分类号：
作者姓名：
林春姿;谢华斌;黄其伟;高上;王加峰
作者机构：
华南农业大学农学院/国家植物航天育种工程技术研究中心,广东 广州 510642
文献出处：
引用格式：
[1]林春姿;谢华斌;黄其伟;高上;王加峰-.利用CRISPR/Cas9技术定向编辑水稻OsIQD1基因)[J].广东农业科学,2022(08):1-10
A类：
OsIQD1,IQD,DUF4005,pRGEB32,osiqd1
B类：
CRISPR,Cas9,水稻,靶蛋白,生物防御,发育调节,酵母双杂,筛选试验,Pik,H4,互作关系,抗稻瘟病,生物学功能,编辑技术,序列比对,外显子,结构域,区域设计,bp,gRNA,农杆菌介导法,NIL,愈伤组织,潮霉素,T0,代转,转基因植株,再生植株,HPT,株系,个位,编辑效率,纯合突变,突变株,突变体,钙离子,信号转导通路,推定,基础免疫,免疫反应,钙调素结合蛋白,基因编辑
AB值：
0.327076
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