[目的]为探明引起禽白血病病毒K亚型(ALV-K)两不同毒株之间致瘤性差异的原因,进一步探索ALV-K的致病机理,实现两株ALV-K重组病毒感染性克隆的构建及病毒拯救.[方法]以前期构建的ALV-K毒株HB2018003和HB2015032的感染性克隆为模板,PCR扩增分别获取两毒株单独的5'-端长末端重复序列(5'-LTR)基因片段和剩余目的基因片段.切胶回收目的片段后将两毒株的5'-LTR互换,通过同源重组的方法获得连接产物.将连接产物转化大肠杆菌DH5a感受态细胞后涂布Amp抗性平板过夜培养,挑取PCR鉴定为阳性的菌落提取重组质粒TOPO-003-032和TOPO-032-003并送检测序.将PCR和测序鉴定正确的重组质粒转染至易感细胞DF-1中盲传3代,使用群特异性抗原P27 ELISA、多重PCR和间接免疫荧光等方法对拯救的病毒进行检测.[结果]测序和重组感染性克隆PCR鉴定的结果表明成功构建了 5'-LTR互换的重组质粒,多重PCR结果显示在目的片段大小处出现ALV-K预期条带,未出现ALV-A和ALV-J条带,间接免疫荧光试验结果显示接种拯救病毒的DF-1细胞出现明显的亮绿荧光,阴性对照则没有出现荧光.综合以上结果,说明两株重组病毒拯救成功,并将其分别命名为rHB2022050(TOPO-032-003)和rHB2022051(TOPO-003-032).[结论]本研究采用同源重组的方法构建了 5'-LTR互换的感染性克隆 TOPO-003-032和TOPO-032-003,并成功拯救出病毒rHB2022050(TOPO-032-003)和 rHB2022051(TOPO-003-032).

禽白血病病毒K亚型(ALV-K);重组病毒;感染性克隆;病毒拯救

王淼;陈雪阳;王兴明;梁雄燕;杨玉莹

长江大学动物科学学院,荆州434025

中国畜牧兽医

[1]王淼;陈雪阳;王兴明;梁雄燕;杨玉莹-.两株ALV-K重组病毒感染性克隆的构建及病毒拯救)[J].中国畜牧兽医,2022(10):3764-3770

HB2018003,HB2015032,DH5a,rHB2022050,rHB2022051

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