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温郁金中茉莉酸氨基酸合酶关键基因JAR的克隆及生物信息学分析
文献摘要：
目的 克隆温郁金茉莉酸氨基酸合酶关键基因JAR(JA-amino acid synthetase)的全长cDNA序列,并进行生物信息学和表达分析.方法 根据温郁金转录组数据设计特异性引物.以温郁金根茎的cDNA为模板,通过RT-PCR扩增获得JAR全长cDNA序列,利用生物信息学软件预测基因编码蛋白的特征;利用ClustalW和MEGA6.06软件构建温郁金JAR的系统进化树;构建原核表达载体PET-22B(+)-JAR,纯化重组蛋白JAR5,并进行鉴定.结果 扩增后的基因编码582个氨基酸,全长1749bp,且具有典型的GH3特征结构域,不具跨膜域,不存在信号肽,属于不稳定蛋白;PCR扩增后得到约1 800 bp大小的片段,经凝胶过滤色谱纯化,最终得到基于蛋白印迹实验(Western blotting)验证正确的66 200大小的重组蛋白.结论 首次克隆并分析了温郁金JAR基因,纯化了JAR5蛋白,为进一步研究温郁金JAR基因蛋白功能研究提供依据.
文献关键词：
温郁金;JAR基因;基因克隆;JAR5;蛋白纯化
中图分类号：
作者姓名：
李帆;薛畅;张金华;任仙樱;喻明军;吴志刚;姜程曦
作者机构：
温州大学生命科学研究院,浙江温州 325035;温州医科大学药学院,浙江温州 325035;大理药业股份有限公司,云南大理 671000;温州莪金医药有限公司,浙江乐清 325600;安徽环球基因科技有限公司,安徽滁州 239004
文献出处：
引用格式：
[1]李帆;薛畅;张金华;任仙樱;喻明军;吴志刚;姜程曦-.温郁金中茉莉酸氨基酸合酶关键基因JAR的克隆及生物信息学分析)[J].中草药,2022(06):1838-1843
A类：
ClustalW,JAR5,1749bp
B类：
温郁金,茉莉酸,关键基因,生物信息学分析,amino,acid,synthetase,全长,cDNA,表达分析,转录组数据,数据设计,特异性引物,金根,根茎,利用生物,生物信息学软件,软件预测,基因编码,编码蛋白,MEGA6,软件构建,系统进化树,原核表达载体,PET,22B,重组蛋白,GH3,特征结构,结构域,跨膜域,信号肽,凝胶过滤,色谱纯化,蛋白印迹实验,blotting,蛋白功能,功能研究,基因克隆,蛋白纯化
AB值：
0.314143
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