典型文献
鸭常见RNA病毒的多重PCR检测方法的建立与初步应用
文献摘要：
1型鸭肝炎病毒(DHAV-1)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)和鸭低致病性H9N2禽流感病毒(AIV)是危害养鸭业的常见病毒性传染病病原.为建立快速鉴别检测以上4种病毒的方法,本研究根据GenBank登录的DHAV-1 vp1基因、MDRV c基因、DTMUV e基因和H9N2(AIV)HA基因序列,分别设计并合成4对特异性引物,经各反应条件的优化,结果显示,4对引物均能分别扩增出DHAV-1、DTMUV、MDRV、H9N2 AIV的特异性片段,确定各病毒最佳上、下游引物终浓度均为0.2μmol/L,退火温度为52℃,25个循环,初步建立了能同时检测DHAV-1、DTMUV、MDRV、H9N2 AIV的多重PCR检测方法.以优化的多重PCR方法分别对DHAV-1 SH、DTMUV JS804、MDRV HNF、H9N2 AIV C/SH/F/98、鸭瘟病毒(DPV F34)、番鸭细小病毒(MDPV FJM3)、传染性法氏囊病病毒(IBDV B87)、新城疫病毒(NDV La Sota)株基因组进行特异性检测,结果显示,分别扩增出DHAV-1、DTMUV、MDRV、H9N2 AIV的特异性片段,与其他4种常见病原均无交叉扩增,特异性较强.将重组质粒标准品pMD-DHAV-1、pMD-DTMUV、pMD-MDRV和pMD-H9N2分别10倍倍比稀释并等体积混合后作为模板,利用本实验建立的多重PCR检测,结果显示该方法对各重组质粒标准品检测下限为102拷贝/μL及以下,敏感性较高.利用该方法3次重复检测随机3批次的4种病毒cDNA混合模板,结果显示各结果均一致,重复性好.利用建立的该方法检测人工混合感染上述4种病毒的10个鸭胚和87份临床疑似病料样品,评估建立的多重PCR方法临床应用的可行性,结果显示该方法能够检出人工混合感染鸭胚样品中的4种病毒;该方法对87份临床疑似病料样品进行检测,检测结果与各病毒单一PCR检测结果均一致.本研究建立的多重PCR检测方法为DHAV-1、DTMUV、MDRV、H9N2 AIV 4种病毒的快速鉴别检测提供了新的技术手段.
文献关键词：
鸭;RNA病毒;多重PCR;检测
中图分类号：
作者姓名：
董亚青;王永娟;王豪伟
作者机构：
江苏农牧科技职业学院,江苏 泰州 225300
文献出处：
引用格式：
[1]董亚青;王永娟;王豪伟-.鸭常见RNA病毒的多重PCR检测方法的建立与初步应用)[J].中国预防兽医学报,2022(11):1183-1188
A类：
vp1,JS804,F34,FJM3,B87
B类：
初步应用,肝炎病毒,DHAV,鸭呼肠孤病毒,MDRV,鸭坦布苏病毒,DTMUV,低致病性,H9N2,禽流感病毒,AIV,养鸭业,常见病,病毒性传染病,快速鉴别,鉴别检测,究根,GenBank,登录,基因序列,并合,特异性引物,反应条件,退火温度,同时检测,SH,HNF,鸭瘟病毒,番鸭细小病毒,MDPV,传染性法氏囊病病毒,IBDV,新城疫病毒,NDV,La,Sota,特异性检测,重组质粒,标准品,pMD,品检,检测下限,拷贝,重复检测,cDNA,混合模,均一,混合感染,染上
AB值：
0.272397
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