目的:基于重组酶介导的扩增技术(recombinase aided amplification，RAA)和CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeats)-Cas13a(CRISPR-associated protein 13a)检测，建立一种快速、灵敏且特异的重要境外输入性病毒检测方法。方法:以流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus，JEV)、黄热病毒(Yellow fever virus，YEV)、西尼罗病毒(West Nile virus，WNV)、中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus，MERS-CoV)、埃博拉病毒(Ebola virus，EBOV)、登革病毒(Dengue virus，DENV)、裂谷热病毒(Rift Valley fever virus，RVFV)、寨卡病毒(Zika virus，ZIKV)为检测对象，设计特异性RAA扩增引物和CRISPR RNA(crRNA)，建立RAA扩增结合CRISPR-Cas13a蛋白检测反应，评价方法的灵敏度和特异性，使用登革热疑似临床样本进行检测，并与荧光RT-PCR技术进行比较，同时检测其余7种病毒临床模拟样本。结果:RAA扩增结合CRISPR-Cas13a蛋白检测方法能在39 ℃条件下，40~52 min内检测出8种输入性传染病病原体，灵敏度达到1~10拷贝/μl，并且这8种病原体之间无交叉反应，临床样本均可100%检测出。结论:建立的RAA扩增结合CRISPR-Cas13a蛋白检测方法能够灵敏、特异且快速地检测出8种境外输入性传染病病原体。

输入性传染病;病毒;重组酶介导的扩增技术;CRISPR-Cas13a

郭悦;安柏霖;刘丹丹;罗君红;赵康辰;朱小娟;葛以跃;吴宏斌;崔仑标

南京医科大学，南京　210029;南开大学药学院　天津国际生物医药联合研究院，天津　300071;江苏省疾病预防控制中心国家卫生健康委员会肠道病原微生物重点实验室，南京　210009;泰州医药城医学检验有限公司，泰州　225300

中华实验和临床病毒学杂志

[1]郭悦;安柏霖;刘丹丹;罗君红;赵康辰;朱小娟;葛以跃;吴宏斌;崔仑标-.重组酶介导的等温扩增技术结合CRISPR-Cas13a蛋白检测8种境外输入性病毒)[J].中华实验和临床病毒学杂志,2022(03):245-251

重组酶介导的扩增技术,YEV,裂谷热病毒

重组酶介导的等温扩增技术,技术结合,CRISPR,Cas13a,蛋白检测,境外输入,recombinase,aided,amplification,RAA,clustered,regularly,interspaced,short,palindromic,repeats,associated,protein,病毒检测,流行性乙型脑炎病毒,Japanese,encephalitis,JEV,黄热病毒,Yellow,fever,西尼罗病毒,West,Nile,WNV,中东呼吸综合征,Middle,East,respiratory,syndrome,coronavirus,MERS,CoV,埃博拉病毒,Ebola,EBOV,登革病毒,Dengue,DENV,Rift,Valley,RVFV,寨卡病毒,Zika,ZIKV,扩增引物,crRNA,测反,登革热,临床样本,同时检测,模拟样本,内检测,输入性传染病,病原体,拷贝,交叉反应

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