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禽腺病毒血清4型Fiber-2蛋白在毕赤酵母中的优化表达及其免疫原性分析
文献摘要：
为研制禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)亚单位疫苗,本研究对FAdV-4的Fiber-2蛋白在毕赤酵母中的发酵工艺进行了优化.首先根据酵母密码子偏好性优化Fiber-2基因,并且构建了重组真核表达载体pPIC9K-Fiber-2.将该质粒转化至毕赤酵母GS115菌株,经不同质量浓度G418筛选获得高拷贝重组菌.随后在摇瓶中进行诱导发酵时温度、时间和甲醇浓度的优化.用优化后的条件进行发酵表达并将上清液通过镍柱纯化得到了重组的Fiber-2蛋白.最后将蛋白与ISA-201-VG油佐剂混合并免疫21日龄SPF鸡进行免疫保护性试验.结果表明:在毕赤酵母中成功且高效的分泌表达了Fiber-2蛋白,分子量约为60 ku,在摇瓶发酵中诱导的最佳甲醇浓度、时间和温度分别为1.0％、72 h和30℃.优化后发酵液上清中的总蛋白量约为50 mg/L,重组Fiber-2蛋白达到8.7 mg/L.SDS-PAGE和Western blot结果表明采用镍柱对蛋白进行纯化可得到条带单一且具有良好免疫原性的重组Fiber-2蛋白.免疫保护性试验显示,由优化后的毕赤酵母表达Fiber-2蛋白制备的亚单位疫苗免疫雏鸡后,可以诱导较高的抗体水平并提供高达100％的超强FAdV-4毒株(GD616)的攻击保护.本研究为进一步采用毕赤酵母表达的重组Fiber-2蛋白制备FAdV-4亚单位疫苗的研发奠定了基础.
文献关键词：
禽腺病毒血清4-型;Fiber-2蛋白;毕赤酵母;亚单位疫苗
中图分类号：
作者姓名：
袁枫;宋慧琦;侯磊;韦莉;朱珊珊;全荣;王菁;王丹;姜海军;刘浩;刘爵
作者机构：
天津科技大学生物工程学院,天津300222;北京市农林科学院畜牧兽医研究所,北京100097;扬州大学兽医学院,江苏扬州225009;扬州大学江苏省重大动物传染病与人畜共患病防控合作创新中心,江苏扬州225009
文献出处：
引用格式：
[1]袁枫;宋慧琦;侯磊;韦莉;朱珊珊;全荣;王菁;王丹;姜海军;刘浩;刘爵-.禽腺病毒血清4型Fiber-2蛋白在毕赤酵母中的优化表达及其免疫原性分析)[J].中国农业大学学报,2022(02):132-142
A类：
GD616
B类：
禽腺病毒,毒血,Fiber,毕赤酵母,免疫原性,Fowl,adenovirus,serotype,FAdV,亚单位疫苗,发酵工艺,密码子偏好性,真核表达载体,pPIC9K,质粒,GS115,G418,拷贝,诱导发酵,上清液,ISA,VG,油佐剂,日龄,SPF,免疫保护,分泌表达,分子量,ku,摇瓶发酵,发酵液,总蛋白,蛋白量,SDS,PAGE,blot,条带,酵母表达,疫苗免疫,雏鸡,抗体水平,超强,毒株
AB值：
0.339686
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