目的 探究N6-甲基腺苷(m6A)去甲基化酶ALKBH5对紫外线诱导的晶状体上皮细胞(LEC)氧化损伤模型中DNA损伤修复的影响.方法 运用qRT-PCR和免疫印迹实验检测年龄相关性白内障(ARC)患者和对照组晶状体前囊膜上皮细胞中ALKBH5的mRNA和蛋白的表达.通过紫外线B(UVB)构建晶状体上皮细胞株SRA01/04细胞氧化损伤模型和靶向ALKBH5设计小干扰RNA(siRNA)转染构建敲降模型,运用qRT-PCR和免疫印迹实验检测氧化损伤模型和敲降模型中ALKBH5的mRNA和蛋白表达.运用CCK-8法检测Control组、UVB组、UVB+siNC组和UVB+siALKBH5#3组中SRA01/04细胞活力变化.免疫荧光染色检测UVB+siNC组和UVB+siALKBH5#3组中15A3的荧光强度变化.运用qRT-PCR检测转染对照siNC组和转染siALKBH5#3组中11个DNA氧化损伤修复基因(ODRGs)的mRNA表达变化.结果 在ARC患者的晶状体前囊膜上皮细胞中,ALKBH5的mRNA和蛋白表达水平均显著升高.在UVB以时间梯度诱导SRA01/04的细胞氧化损伤模型中,ALKBH5的mRNA和蛋白表达水平均呈上升后下降趋势,其中UVB照射10 min后ALKBH5 mRNA和蛋白表达升高最为显著.ALKBH5敲降效率结果显示,与转染对照siNC组相比,转染靶向ALKBH5的siRNA后,ALKBH5的mRNA和蛋白表达均显著下降.CCK-8法检测结果显示,与UVB+siNC组相比,UVB+siALKBH5#3组SRA01/04细胞活力明显降低.免疫荧光染色检测结果显示,与UVB+siNC组相比,UVB+siALKBH5#3组SRA01/04细胞内DNA氧化损伤指标15A3染色显著增加.同时,与转染对照siNC组相比,转染ALKBH5#3组SRA01/04细胞的ODRGs中,TREX1、FANCD2、LIG1、MSH2、MSH3、RPA2、SMUG1、XRCC6 mRNA的表达均显著上升,DCLRE1A mRNA的表达显著下降,MGMT和MRE11A mRNA的表达则未见明显差异.结论 m6A去甲基化酶ALK-BH5在UVB诱导的LEC氧化损伤模型中诱导性表达上升,敲降ALKBH5可促进LEC内大部分ODRGs表达升高,参与调控LEC内损伤DNA的修复,阻止ARC的发生.

年龄相关性白内障;DNA损伤修复;晶状体上皮细胞;紫外线B;N6-甲基腺苷;ALKBH5

李鹏飞;鲍思洁;王从玉;王思文;孙诚浩;康丽华;管怀进

226001 江苏省南通市,南通大学附属医院眼科,南通大学医学院

眼科新进展

[1]李鹏飞;鲍思洁;王从玉;王思文;孙诚浩;康丽华;管怀进-.ALKBH5对紫外线诱导的晶状体上皮细胞氧化损伤模型中DNA损伤修复的影响)[J].眼科新进展,2022(11):847-852,862

UVB+siNC,UVB+siALKBH5#3,15A3,siALKBH5#3,ODRGs,ALKBH5#3,SMUG1,XRCC6,DCLRE1A,BH5

紫外线,晶状体上皮细胞,细胞氧化损伤,损伤模型,损伤修复,N6,腺苷,m6A,去甲基化酶,LEC,qRT,免疫印迹实验,实验检测,年龄相关性白内障,ARC,前囊膜,细胞株,SRA01,小干扰,siRNA,转染,CCK,Control,细胞活力,免疫荧光染色,荧光强度,强度变化,表达变化,蛋白表达水平,时间梯度,氧化损伤指标,TREX1,FANCD2,LIG1,MSH2,MSH3,RPA2,MGMT,MRE11A,诱导性

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