目的 探讨一氧化氮(NO)对角膜神经再生的影响作用.方法 本研究以亚硝酸钠(NaNO2)作为外源性NO供体,在细胞实验中以小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro-2a)为研究对象.采用不同浓度的NaNO2处理Neuro-2a细胞并筛选出NO的最佳神经营养浓度.在动物实验中,将30只SD大鼠随机分组,10只作为NC组,其余20只大鼠建立角膜碱烧伤模型,再随机分为PBS组和NO组,每组10只.从碱烧伤当天开始,PBS组给予PBS治疗,NO组给予10.00μmol·L-1 NaNO2与PBS混合治疗.用荧光素钠染色后观察并记录大鼠角膜上皮愈合情况,计算角膜上皮愈合率.用CCK-8检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫荧光法检测细胞神经元标记物的表达.于大鼠角膜碱烧伤处理后7 d取大鼠角膜上皮组织,分别采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测每组角膜上皮中神经元标志物βⅢ-微管蛋白和神经生长因子(N GF)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、睫状神经营养因子(CNTF)的表达水平.结果 10.00μmol·L-1 NaNO2处理Neuro-2a细胞24 h后可显著提高细胞活性;使用浓度为0.00μmol·L-1、10.00μmol·L-1、1000.00μmol·L-1的NaNO2处理Neuro-2a细胞24 h后,测得细胞凋亡率分别为18.60％、13.00％、19.48％;与0.00μmol·L-1组相比,10.00μmol·L-1组细胞凋亡率降低(P<0.01).与0.00μmol·L-1组相比,10.00μmol·L-1组Neuro-2a细胞βⅢ-微管蛋白、MAP2和SMI312三种神经元标志物相对表达量均增加(均为P<0.05).碱烧伤后1 d、3 d、7 d,与PBS组相比,NO组大鼠角膜上皮愈合率均升高(均为P<0.05).与NC组相比,PBS组和NO组大鼠角膜组织各神经营养因子mRNA的相对表达量均增高(均为P<0.05).与PBS组相比,NO组大鼠角膜组织NGF、GDNF、CNTF mRNA的相对表达量均增高(均为P<0.05).Western blot检测结果显示:碱烧伤后7 d,与NC组相比,PBS组和NO组大鼠角膜组织βⅢ-微管蛋白、NGF、GDNF、CNTF的蛋白表达水平均增高(均为P<0.05);与PBS组相比,NO组大鼠角膜组织βⅢ-微管蛋白、NGF、GDNF、CNTF蛋白的表达水平均明显增高,差异均有统计学意义(均为P<0.05).结论 气体信号分子NO能促进神经细胞的生长以及相关神经元标志物的表达;在大鼠角膜碱烧伤模型中,局部应用外源性NO进行治疗,可对角膜上皮和角膜神经产生明显的营养作用.

角膜碱烧伤;一氧化氮;角膜神经再生;神经生长因子

向征;石赟懿;谭钢

421005 湖南省衡阳市,南华大学附属第一医院眼科

眼科新进展

[1]向征;石赟懿;谭钢-.一氧化氮(NO)对角膜神经再生的影响作用)[J].眼科新进展,2022(10):769-774

角膜神经再生,SMI312

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