目的：:探讨沉默信息调节蛋白1（SIRT1）对人葡萄膜黑色素瘤细胞增殖的影响。方法：:实验研究。通过定量PCR和Western blot法检测SIRT1在葡萄膜黑色素瘤细胞（M23和SP6.5）和正常人葡萄膜黑色素细胞（DM78、UM95和UM96）中的表达。在葡萄膜黑色素瘤细胞（M23、SP6.5）中，用EX527抑制SIRT1活性，以溶剂DMSO作为阴性对照组；用SIRT1小干扰RNA（siSIRT1）转染细胞抑制SIRT1表达，以无义小干扰RNA（NC）转染作为阴性对照组。细胞增殖实验（MTS）、流式细胞术、平板克隆形成实验分别检测细胞活性、细胞周期以及细胞克隆形成能力。裸鼠眼内成瘤实验检测葡萄膜黑色素瘤细胞眼内成瘤能力。Western blot法检测增殖相关蛋白。组间数据均采用独立样本 t检验进行比较。 结果：:与葡萄膜黑色素细胞相比，葡萄膜黑色素瘤细胞（M23、SP6.5）中SIRT1 mRNA（ t=17.08， P<0.001； t=13.24， P<0.001）和蛋白（ t=6.26， P=0.008）表达水平显著升高。MTS结果显示，EX527抑制M23和SP6.5细胞活性，并呈药物浓度依赖性；与NC转染组相比，siSIRT1转染组细胞活性显著减弱（ t=5.94， P<0.001； t=10.73， P<0.001）。与溶剂DMSO组相比，EX527处理组（ t=5.10， P=0.047； t=7.57， P=0.002）和SIRT1 siRNA转染组（ t=6.41， P=0.003； t=6.10， P=0.004）中处于G1期的细胞比例均显著升高。另外，M23和SP6.5细胞EX527处理组（ t=5.04， P=0.001； t=5.93， P<0.001）和siSIRT1转染组（ t=11.44， P<0.001； t=8.24， P<0.001）克隆形成数量显著降低。在裸鼠眼内成瘤实验中，与NC组相比，siSIRT1转染组眼内瘤体大小显著变小（ t=5.50， P<0.001）。Western blot结果显示，与DMSO处理组相比，EX527处理组中P21（ t=4.63， P=0.010； t=7.90， P=0.001）表达升高，E2F1（ t=12.10， P=0.003； t=5.96， P=0.004）、CYCLIND2（ t=36.28， P<0.001； t=16.58， P<0.001）、p-RB（ t=17.55， P<0.001； t=21.34， P<0.001）表达降低，p-AKT表达下调。与NC转染组相比，siSIRT1转染组中，P21（ t=5.88， P=0.004； t=10.51， P<0.001）表达升高，E2F1（ t=4.60， P=0.01； t=4.89， P=0.008）、CYCLIND2（ t=5.13， P=0.007； t=5.63， P=0.005）、p-RB（ t=4.45， P=0.011； t=6.53， P=0.003）表达水平降低，p-AKT（ t=9.61， P<0.001； t=6.44， P=0.003）表达下调。 结论：:抑制SIRT1活性或表达可以明显抑制葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖，提示SIRT1可以作为治疗葡萄膜黑色素瘤的一个新靶标。

沉默信息调节蛋白1;EX527;葡萄膜黑色素瘤细胞;细胞增殖

温州医科大学附属眼视光医院　省部共建眼视光学和视觉科学国家重点实验室，温州　325027

[1]林永;李丽;刘琦;闫东升-.SIRT1对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖的表观遗传调控)[J].中华眼视光学与视觉科学杂志,2022(05):329-336

DM78,UM95,UM96,siSIRT1,CYCLIND2

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