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自噬激活剂雷帕霉素对A2E诱导视网膜色素上皮细胞自噬调节的影响
文献摘要：
目的 探讨自噬激活剂雷帕霉素对N-亚视黄基-N-视黄基乙醇胺(A2E)诱导视网膜色素上皮(RPE)细胞自噬调节的影响.方法 取人RPE细胞(ARPE-19细胞系)进行培养.将细胞分为4组,其中,对照组:使用DMEM-F12完全培养基孵育ARPE-19细胞;A2E组:使用含20μmol·L-1 A2E的DMEM-F12完全培养基孵育ARPE-19细胞;雷帕霉素组:使用含100 nmol·L-1雷帕霉素的DMEM-F12完全培养基预处理细胞1 h后,再用DMEM-F12完全培养基孵育ARPE-19细胞;雷帕霉素联合A2E组:使用100 nmol·L-1雷帕霉素预处理细胞1 h后,再用含20μmol·L-1 A2E的DMEM-F12完全培养基孵育ARPE-19细胞.使用CCK-8法检测各组细胞增殖情况,Procarta细胞因子分析试剂盒检测各组细胞培养上清液中细胞因子表达情况.透射电镜观察各组细胞超微结构,Western blot法检测各组细胞自噬相关蛋白Beclin-1和P62的表达,免疫荧光染色法检测各组细胞自噬标志物LC3蛋白的表达.结果 与对照组相比,A2E组细胞生存率显著下降(P<0.001),而雷帕霉素联合A2 E组细胞生存率得到了部分恢复,与A2 E组相比差异有统计学意义(P<0.01).与A2E组相比,雷帕霉素联合A2E组中10种细胞因子含量均有所下降(均为P<0.01).与对照组相比,雷帕霉素组细胞内出现散在自噬囊泡,A2E组细胞内出现较多的自噬囊泡,而雷帕霉素联合A2 E组细胞内出现大量聚集的大体积的自噬囊泡.与对照组相比,A2E组中Beclin-1蛋白相对表达量显著升高(P<0.001),P62蛋白相对表达量显著降低(P<0.001);与A2E组相比,雷帕霉素联合A2E组中Beclin-1蛋白相对表达量明显升高(P<0.01),而P62蛋白相对表达量明显降低(P<0.001).雷帕霉素联合A2E组ARPE-19细胞内LC3蛋白的绿色荧光斑点大量聚集,与A2E组相比荧光强度增加,斑点体积更大,数量也更多.结论 雷帕霉素能够进一步激活A2E诱导的ARPE-19细胞自噬活性,一定程度上降低了A2E对RPE细胞造成的损伤,并抑制了ARPE-19细胞中炎症因子和血管生成因子的分泌.
文献关键词：
N-亚视黄基-N-视黄基乙醇胺;雷帕霉素;视网膜色素上皮细胞;自噬;年龄相关性黄斑变性
中图分类号：
作者姓名：
陈云珍;张晶晶
作者机构：
102600 北京市,首都医科大学大兴教学医院眼科
文献出处：
引用格式：
[1]陈云珍;张晶晶-.自噬激活剂雷帕霉素对A2E诱导视网膜色素上皮细胞自噬调节的影响)[J].眼科新进展,2022(12):942-946
A类：
A2E,Procarta
B类：
激活剂,雷帕霉素,导视,视网膜色素上皮细胞,细胞自噬,亚视,乙醇胺,ARPE,细胞系,DMEM,F12,孵育,nmol,CCK,试剂盒,细胞培养,养上,上清液,透射电镜,电镜观察,细胞超微结构,blot,自噬相关蛋白,Beclin,P62,免疫荧光染色法,LC3,囊泡,大体积,白相,相对表达量,光斑点,荧光强度,血管生成因子,年龄相关性黄斑变性
AB值：
0.142639
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