目的:探讨miR-223-3p对Notch信号通路转录因子Rbpj表达的调控作用以及对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)大鼠Th1、Th17细胞分化水平的影响.方法:用双荧光素酶表达报告系统探讨miR-223-3p对Rbpj基因表达的调控作用.将24只雌性Lewis大鼠随机分为EAU模型组、正常对照组(NC组)和空白对照组(BC组),每组8只.EAU模型组注射含光感受器间维生素A结合蛋白(IRBP)、结核菌素和完全弗氏佐剂的乳糜液以诱导葡萄膜炎,BC组注射等体积的不含IRBP多肽的乳糜液,NC组注射等体积的无菌生理盐水.免疫后12d,无菌分离三组大鼠的脾脏、淋巴结和眼组织,实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测miR-223-3p和Rbpj基因的表达水平;酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测Rbpj、IFN-γ、IL-17蛋白的表达水平;流式细胞仪检测三组大鼠不同组织中Th1和Th17细胞的表达水平.结果:双荧光素酶检测结果证实Rbpj是miR-223-3p调控的靶基因.免疫后12d,相比于NC组,EAU模型组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中miR-223-3p相对表达水平分别为0.33±0.29、0.11±0.12、0.18±0.11,均呈下调表达(均P<0.05);Rbpj mRNA水平均呈上调表达,分别为3.00±0.06、1.52±0.12、3.01±0.34(均P<0.05);BC组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中miR-223-3p和Rbpj mRNA水平与NC组相比均无差异(P>0.05).ELISA检测结果发现,免疫后12d的EAU模型组大鼠各组织中Rbpj、IFN-γ、IL-17蛋白表达水平均明显高于NC组(均P<0.05),BC组大鼠各组织中Rbpj、IFN-γ、IL-17蛋白表达水平与NC组相比均无差异(P>0.05).流式细胞仪检测结果显示,免疫后12d,EAU模型组各组织的Th1和Th17细胞比例均显著高于NC组(均P<0.05).BC组与NC组各组织Th1和Th17细胞比例无明显变化(均P>0.05).结论:miR-223-3p可负调控Notch信号通路转录因子Rbpj的表达.EAU大鼠中miR-223-3p的下调表达可升高Rbpj基因和蛋白的表达水平,促进Th1和Th17细胞的分化以及提高相关分子IFN-γ和IL-17的表达水平,进而影响葡萄膜炎的发生发展.

miR-223-3p;Rbpj;实验性自身免疫性葡萄膜炎;Th1;Th17;IFN-γ;IL-17

周梦贤;屈如意;殷学伟;郭励劼;邱岩;郭大东

250014 中国山东省济南市,山东中医药大学;100069 中国北京市,首都医科大学;250002 中国山东省济南市,山东中医药大学第二附属医院;250002 中国山东省济南市,山东省中西医结合眼病防治重点实验室 山东省高校中西医结合眼病防治技术(强化)重点实验室 山东中医药大学眼科研究所

国际眼科杂志

[1]周梦贤;屈如意;殷学伟;郭励劼;邱岩;郭大东-.miR-223-3p靶向调控Rbpj转录因子对葡萄膜炎大鼠Th1和Th17细胞分化的影响)[J].国际眼科杂志,2022(05):769-774

Rbpj

miR,3p,靶向调控,Th17,细胞分化,Notch,实验性自身免疫性葡萄膜炎,EAU,双荧光素酶,报告系统,雌性,Lewis,正常对照,NC,空白对照,BC,光感受器,结合蛋白,IRBP,结核菌素,完全弗氏佐剂,乳糜,多肽,无菌,生理盐水,12d,脾脏,淋巴结,眼组织,酶联免疫吸附测定,IFN,流式细胞仪,不同组织,靶基因,相对表达,蛋白表达水平,负调控,细胞的分化

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