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基于高分辨率熔解曲线技术的CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变快速检测研究
文献摘要：
旨在建立一种通过高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)分析技术快速检测CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变的方法.采用野生型、纯合突变及杂合突变小鼠胚胎干细胞优化和完善HRM检测条件,然后应用建立的HRM方法对30个测序结果已知的CRISPR/Cas9技术编辑过的小鼠胚胎干细胞单克隆进行检测,根据熔解温度与熔解曲线的差异区分野生型、纯合突变型及杂合突变型,以验证HRM方法的可行性和准确性.结果表明,优化的HRM检测方法能够鉴别野生型、纯合突变型及杂合突变型小鼠胚胎干细胞.应用建立的HRM方法分析30个CRISPR/Cas9技术编辑过的小鼠胚胎干细胞单克隆,结果显示,14个单克隆为杂合突变型、2个单克隆为纯合突变型、14个单克隆为野生型,与测序结果一致,准确率为100％.本研究建立的高分辨率熔解曲线法能对CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变进行快速筛选,是一种灵敏、准确、简便、高通量的方法.
文献关键词：
高分辨率熔解曲线;CRISPR/Cas9;细胞基因突变;检测
中图分类号：
作者姓名：
陈黎;卢茜;杨红兰;张鹏;何志旭
作者机构：
贵州医科大学基础医学院免疫学教研室组织工程与干细胞实验中心,贵阳550004;中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室,贵阳 550004;遵义医科大学附属医院儿科,遵义 563000
文献出处：
引用格式：
[1]陈黎;卢茜;杨红兰;张鹏;何志旭-.基于高分辨率熔解曲线技术的CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变快速检测研究)[J].生物技术通报,2022(10):90-96
A类：
B类：
高分辨率熔解曲线,CRISPR,Cas9,细胞基因突变,变快,快速检测,high,resolution,melting,HRM,野生型,纯合突变,杂合突变,小鼠胚胎干细胞,检测条件,技术编辑,单克隆,分野,突变型,熔解曲线法,快速筛选
AB值：
0.152103
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