[背景]地方性砷中毒肝损伤较为严重.研究表明,氧化应激、蛋白酶体β5亚基(PSMB5)、调节转录因子EB(TFEB)和溶酶体与肝损伤有关,但它们与砷中毒肝损伤的具体联系尚不清楚.[目的]利用课题组前期建立的亚砷酸钠(NaAsO2)致大鼠肝损伤模型,检测肝组织中PSMB5、TFEB和溶酶体关联膜蛋白1(LAMP1)的表达.[方法]24只SPF级Wistar大鼠随机分为对照组,低、中、高浓度组,每组6只,雌雄各半;染毒浓度分别为0、25、50、100 mg·L-1 NaAsO2水溶液,染毒24周.染毒结束后,麻醉大鼠取肝脏.采用化学比色法检测肝组织碱性磷酸酶(ALP)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆汁酸(TBA)、过氧化氢酶(CAT)水平;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测肝组织脂质过氧化物(LPO)、4-羟基壬烯醛(4-HNE)、LAMP1、组织蛋白酶D(CTSD)水平;采用实时荧光定量PCR法检测肝组织PSMB5、TFEB转录表达水平;采用免疫组化检测肝组织PSMB5、TFEB、磷酸化TFEB(p-TFEB)蛋白表达情况.[结果]化学比色法和ELISA法结果显示:与对照组相比,各染砷组大鼠肝匀浆ALP、TBA、LAMP1,中、高浓度组ALT、LPO,高浓度组4-HNE、CTSD水平均升高,而各染砷组CAT活性均降低(P＜0.05).实时荧光定量PCR结果显示:各染砷组肝组织PSMB5、TFEB转录水平与对照组相比均下降(P＜0.05).免疫组化结果显示:与对照组比较,各染砷组肝组织PSMB5,中、高浓度组TFEB蛋白表达均下降,而各染砷组p-TFEB蛋白表达均升高(P＜0.05);随染砷浓度增加,TFEB蛋白表达在胞核逐渐减弱,p-TFEB蛋白表达在细胞质中逐渐增强,p-TFEB在胞核未见表达.Pearson相关性分析结果显示:肝组织PSMB5与CAT呈正相关(r=0.818,P＜0.05),与 4-HNE、p-TFEB 呈负相关(r=-0.582,r=-0.899;P＜0.05);TFEB 与 CTSD、LAMP1 均呈负相关(r=-0.457,r=-0.564;P＜0.05);CTSD 与 ALT、ALP 均呈正相关(r=0.529、r=0.485;P＜0.05).[结论]NaAsO2长期暴露可诱导氧化应激发生,抑制PSMB5和TFEB表达,促使细胞质中p-TFEB累积增多,活性TFEB入核减少,溶酶体受损,引起肝脏损伤.

砷;氧化应激;肝损伤;溶酶体;蛋白酶体B5亚基;转录因子EB

汪红铃;时明阳;毕顶念;支海燕;胡倩;胡勇

贵州医科大学,公共卫生与健康学院/环境污染与疾病监控教育部重点实验室,贵州贵阳550025

环境与职业医学

[1]汪红铃;时明阳;毕顶念;支海燕;胡倩;胡勇-.氧化应激、PSMB5、TFEB和溶酶体在亚砷酸钠致大鼠肝损伤中的作用)[J].环境与职业医学,2022(10):1134-1139

PSMB5

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