典型文献
缺刻缘绿藻Δ15脂肪酸去饱和酶的功能分析
文献摘要：
缺刻缘绿藻(Myrmecia incisa Reisigl)是一种富含多不饱和脂肪酸的球形单细胞淡水绿藻.在脂肪酸合成途径中,脂肪酸去饱和酶与脂肪酸酰基结合载体结合进行脂肪酸去饱和反应.为探究与缺刻缘绿藻中Δ15脂肪酸去饱和酶(fatty acid desaturase,FAD)结合的脂肪酸酰基结合载体,选用酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)INVSc1和聚球藻(Synechococcus sp.)PCC7942分别验证Δ15 FAD与酰基辅酶A(酰基-CoA)或酰基载体蛋白(酰基-ACP)结合的脂肪酸去饱和过程.根据缺刻缘绿藻的 Δ15 FAD基因构建双源表达载体pYES2-Δ15 FAD和pCAMBIA1300-Δ15 FAD,通过电穿孔法将重组表达质粒分别转入酿酒酵母INVSc1和聚球藻PCC7942中,筛选得到转基因菌株.取相同细胞数的转基因酵母和转基因聚球藻,培养时分别添加等量的底物亚油酸(linoleic acid,18:2Δ9,12,LA),以LA作为酰基受体,使其进入转基因酵母和转基因聚球藻的生物合成途径中,培养36～72 h.利用气相色谱-质谱联用系统对总脂肪酸的各组分进行分析,结果显示,在转基因实验组中检测到LA和α-亚麻酸(α-linolenic acid,18:3Δ9,12,15,ALA)的存在,空白实验则未检测出相应的产物.通过计算,转基因酵母催化LA生成ALA的效率为29.31％,转基因聚球藻催化底物LA生成ALA的效率为30.86％.结果证明无论是酰基-ACP还是酰基-CoA,与缺刻缘绿藻中的Δ15 FAD结合进行反应的效率相近,不存在偏好性,由于Δ15 FAD是特异性蛋白,因此证明缺刻缘绿藻中的Δ15 FAD属于脂酰基结合蛋白.
文献关键词：
缺刻缘绿藻;Δ15脂肪酸去饱和酶;酿酒酵母;聚球藻;脂肪酸;气相质谱联用
中图分类号：
作者姓名：
梁浩;周志刚
作者机构：
上海海洋大学 水产遗传资源开发利用教育部重点实验室,上海 201306;上海海洋大学 科技部海洋生物科学国际研究中心,上海 201306
文献出处：
引用格式：
[1]梁浩;周志刚-.缺刻缘绿藻Δ15脂肪酸去饱和酶的功能分析)[J].上海海洋大学学报,2022(06):1351-1360
A类：
缺刻缘绿藻,Myrmecia,incisa,Reisigl,PCC7942
B类：
去饱和,功能分析,多不饱和脂肪酸,单细胞,淡水,水绿,脂肪酸合成途径,酰基,fatty,acid,desaturase,FAD,酿酒酵母,Saccharomyces,cerevisiae,INVSc1,聚球藻,Synechococcus,sp,基辅,辅酶,CoA,载体蛋白,ACP,表达载体,pYES2,pCAMBIA1300,电穿孔,重组表达,质粒,转入,选得,转基因,加等,等量,底物,亚油酸,linoleic,生物合成途径,联用系统,亚麻酸,linolenic,ALA,空白实验,未检,偏好性,结合蛋白,气相质谱联用
AB值：
0.259756
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