典型文献
分子串联重复策略用于制备超短肽
文献摘要：
超短肽具有更好的稳定性、组织渗透性、生物相容性以及更低的免疫原性.GHK(glycyl-L-histidyl-L-lysine)和 GQPR(glycyl-L-glutamyl-L-prolyl-L-arginine)具有刺激胶原蛋白产生、减缓胶原蛋白降解的作用,作为抗皱成分广泛应用于化妆品.超短肽一般都是通过固相合成方法制备,其缺陷是制备过程中大量使用有机化学试剂而造成环境负担,故本文探讨了一种设计和制备超短肽的新方法.因序列短而无法直接重组表达,文中首先构建了适用于融合表达的载体骨架pET28a-Trxm.以GHK和GQPR串联重复基因作为滚环扩增的基本单元(tandem repeat of short peptides,TRSP),反应时随机掺入5-甲基胞嘧啶获得长基因片段,然后经Acc65 Ⅰ和ApaⅠ消化产生随机长度的基因.胶回收500 bp到1 500 bp的DNA片段,克隆得到表达载体pET28a-Trxm-(TRSP)n并转化获得重组菌.双酶切及测序结果表明,成功构建获得串联重复数n=1、2、3、4、6、7、8、9的阳性克隆.蛋白表达结果显示,当串联重复数n=l、2、3、4、8、9时均有相应融合蛋白表达,表达水平随着重复数增加而降低.Trxm-(TRSP)1表达水平最高,达总蛋白的50％,而Trxm-(TRSP)2表达水平为总蛋白的30％.进一步地,含Trxm-(TRSP)1的清液先后经肠激酶和胰蛋白酶切割后,HPLC分析结果表明,成功获得超短肽GHK和GQPR.该结果对于超短肽重组制备的工业化应用具有重要价值.
文献关键词：
串联重复基因;滚环扩增;超短肽;融合蛋白;重组制备
中图分类号：
作者姓名：
赵晨;李端华;李进军;王辂
作者机构：
成都大学药学院四川抗菌素工业研究所抗生素研究与再评价四川省重点实验室,四川成都610106
文献出处：
引用格式：
[1]赵晨;李端华;李进军;王辂-.分子串联重复策略用于制备超短肽)[J].生物工程学报,2022(12):4587-4600
A类：
超短肽,GHK,glycyl,histidyl,GQPR,Trxm,TRSP,Acc65,重组制备
B类：
子串,渗透性,生物相容性,免疫原性,lysine,glutamyl,prolyl,arginine,胶原蛋白,蛋白降解,抗皱,化妆品,固相合成,合成方法,制备过程,有机化学,化学试剂,成环,重组表达,融合表达,体骨,pET28a,串联重复基因,滚环扩增,基本单元,tandem,repeat,short,peptides,掺入,胞嘧啶,Apa,机长,bp,表达载体,双酶,重复数,融合蛋白表达,总蛋白,肠激酶,胰蛋白酶,HPLC,工业化应用
AB值：
0.261153
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