典型文献
基于TaqMan探针多重实时荧光PCR的肠道特殊菌群绝对定量方法的建立
文献摘要：
本研究旨在建立对肠道主要共生菌的快速定量方法.根据细菌16S rRNA基因的保守序列并参考相关研究,设计针对总肠道菌群的通用引物和探针,以及针对双歧杆菌属、肠球菌属和肠杆菌科的特异性引物和探针,采用引物设计工具(Primer-BLAST)以及聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增以验证引物和探针的特异性.通过分子克隆技术,构建各目标菌属目的基因的重组质粒作为qPCR检测的标准模板,选择标准模板进行重复性实验,并计算组内和组间重复变异系数.用所建立的方法对不同年龄段的临床粪便标本进行3类细菌的检测,并初步分析这些菌群与增龄的关系.结果显示,引物和探针具有较高的特异性;各目的细菌标准曲线在一定范围内线性关系良好,总菌群或各目标菌属的线性范围分别为:总菌群2.9×103～2.9×1012copies/μL、双歧杆菌3.1×102～3.1×109 copies/μL、肠球菌5.9×102～5.9×109 copies/μL、肠杆菌6.3×102～6.3×109 copies/μL,决定系数R2≥0.995;检测的最低拷贝数为总菌群7.5×102 copies/μL、双歧杆菌46 copies/μL、肠球菌37 copies/μL、肠杆菌51 copies/μL;重复性实验变异系数在1.32％以下,具有良好的可重复性.对不同年龄段临床粪便标本检测的结果显示,肠球菌和肠杆菌含量随增龄呈增长趋势,且老年组含量显著高于青年组,但在高龄老年人中未发现肠球菌数量增加.双歧杆菌含量随增龄减少,且各组间差异显著,在高龄老年人中也未观察到双歧杆菌显著减少.结果提示,本研究建立了一种可供临床推广的菌群绝对定量方法,能够同时检测3类细菌和菌群总量,对于菌群定量研究具有实际意义.
文献关键词：
肠道菌群;绝对定量;TaqMan探针;多重实时定量PCR;肠杆菌科
中图分类号：
作者姓名：
王虹;施美芳;杨浩;邬永琳;肖振明;谯鹏;屈一帆;荣星喻;赵超
作者机构：
复旦大学基础医学院教育部医学分子病毒学重点实验室,上海 200032;上海市宝山区友谊社区街道卫生服务中心检验科,上海 201999;国家老年疾病临床医学研究中心(复旦大学附属华山医院),上海 200040
文献出处：
引用格式：
[1]王虹;施美芳;杨浩;邬永琳;肖振明;谯鹏;屈一帆;荣星喻;赵超-.基于TaqMan探针多重实时荧光PCR的肠道特殊菌群绝对定量方法的建立)[J].微生物与感染,2022(03):129-138
A类：
1012copies
B类：
TaqMan,道特,绝对定量,定量方法,共生菌,16S,rRNA,保守序列,肠道菌群,通用引物,双歧杆菌属,肠球菌属,肠杆菌科,特异性引物,引物设计,设计工具,Primer,BLAST,聚合酶链式反应,polymerase,chain,reaction,分子克隆,克隆技术,目标菌,属目,目的基因,重组质粒,qPCR,复变,不同年龄段,粪便标本,初步分析,增龄,针具,标准曲线,内线,线性范围,决定系数,低拷贝,拷贝数,可重复性,青年组,高龄老年人,临床推广,同时检测,定量研究,实际意义,实时定量
AB值：
0.320987
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