目的 探讨微小RNA-146a(MicroRNA-146a,miR-146a)在缺血性脑卒中小胶质细胞/巨噬细胞极化中的作用及其潜在机制.方法 构建大脑中动脉闭塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,脑内注射阴性对照物(Negative control mimic,NC mimic)或miR-146a mimic;构建BV2小鼠小胶质细胞(BV2 mouse microglia,BV2)缺血缺氧(Oxygen glucose deprivation,OGD)模型,将NC mimic,miR-146a mimic转染至OGD处理的BV2细胞中,进行改良神经功能缺损评分(Modified neurological severity scores,mNSS)评估神经功能;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色检测脑梗死体积;实时荧光定量聚合酶链反应(Real time quantification polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测脑组织及细胞中的miR-146a、单核细胞趋化蛋白1(Monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)、诱导型一氧化氮合酶(Inducible ni-tric oxide synthase,iNOS)、白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)和精氨酸酶-1(Arginase-1,Arg1)mRNA水平;免疫荧光染色检测小胶质细胞M1/M2极化标志物;蛋白质免疫印迹(Western blot)检测细胞中Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核转录因子κB(Nuclear transciption factor kappa B,NF-κB)通路蛋白的表达水平;双荧光素酶报告基因检测miR-146a与肿瘤坏死因子受体相关因子6(TNF receptor associated factor 6,TRAF6)的靶向关系.结果 与假手术(Sham)组比较,MCAO组大鼠脑组织中miR-146a表达水平显著降低,mNSS评分和脑梗死体积显著升高,CD16+Iba-1+细胞和CD206+Iba-1+细胞数量均增加,M1标志物MCP-1,iNOS和M2标志物IL-10,Arginase-1 mRNA水平均显著升高,而过表达miR-146a后mNSS评分和脑梗死体积显著降低,M1极化标志物水平降低,M2极化标志物水平升高(P<0.05).与对照(Control)组比较,OGD组BV2小胶质细胞中的miR-146a表达水平显著降低,集群分化因子16(Cluster of differentiation 16,CD16)+离子钙接头蛋白分子-1(Ionized calcium bindingad aptormolecule-1,Iba-1)+和集群分化因子206(Cluster of differentiation 206,CD206)+Iba-1+细胞数量均增加,MCP-1,iNOS,IL-10和Arginase-1 mRNA水平均显著升高,TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达水平均显著升高;与OGD+NC mimic组比较,OGD+miR-146a mimic组细胞中的miR-146a表达水平显著升高,M1极化标志物水平降低,M2极化标志物水平升高,TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达水平均显著降低(P<0.05).结论 miR-146a通过TLR4/NF-κB通路来促进缺血性脑卒中后M2极化,从而发挥神经保护作用.

miR-146a;缺血性脑卒中;小胶质细胞/巨噬细胞;极化;Toll样受体4/核转录因子κB通路

刘梦;刘成志;方敬献

473004 河南省南阳市第一人民医院神经内一科

卒中与神经疾病

[1]刘梦;刘成志;方敬献-.miR-146a通过TL4/NF-κB通路调节小胶质细胞/巨噬细胞极化对缺血性脑卒中的保护作用)[J].卒中与神经疾病,2022(06):511-518

transciption,CD16+Iba,CD206+Iba,bindingad,aptormolecule,+Iba,OGD+NC,OGD+miR

146a,TL4,小胶质细胞,巨噬细胞极化,MicroRNA,潜在机制,大脑中动脉闭塞,Middle,cerebral,artery,occlusion,MCAO,脑内注射,Negative,control,mimic,BV2,mouse,microglia,缺血缺氧,Oxygen,glucose,deprivation,转染,神经功能缺损评分,Modified,neurological,severity,scores,mNSS,苯基,四氮唑,Triphenyltetrazolium,chloride,TTC,脑梗死体积,实时荧光定量聚合酶链反应,Real,quantification,polymerase,chain,reaction,qPCR,单核细胞趋化蛋白,Monocyte,chemotactic,protein,MCP,诱导型一氧化氮合酶,Inducible,tric,oxide,synthase,iNOS,Interleukin,精氨酸酶,Arginase,Arg1,免疫荧光染色,M1,M2,蛋白质免疫印迹,blot,Toll,样受体,like,receptor,TLR4,核转录因子,Nuclear,kappa,通路蛋白,双荧光素酶报告基因,基因检测,相关因子,associated,TRAF6,假手,Sham,大鼠脑组织,1+,细胞数量,而过,过表达,平降,Control,Cluster,differentiation,离子钙,接头,头蛋白,Ionized,calcium,蛋白表达水平,缺血性脑卒中后,神经保护作用

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