目的:探讨高表达microRNA（miR）-17的内皮祖细胞外泌体（EPC-EX）对糖尿病缺血性脑卒中的治疗作用。方法:原代培养从C57BL/6小鼠（n=12）骨髓中提取的内皮祖细胞（EPC），采用装载miR-17载体的慢病毒感染EPC获得EPCmiR-17，同时采用装载有scramble序列的对照慢病毒感染EPC获得EPCNC。分离提取EPCNC及EPCmiR-17释放的外泌体（EX），分别获得EPC-EX及EPC-EXmiR-17。（1）在C57BL/6小鼠（8~12周）中，连续7 d进行腹腔注射链脲佐菌素（STZ）40 mg/kg建立糖尿病模型，线栓法建立糖尿病小鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型，小鼠MCAO术后2 h尾静脉注射2×109/100 μl EPC-EX或者EPC-EXmiR-17，小鼠分为正常对照组（con）、糖尿病脑卒中组（STZ+MCAO）、EPC-EX处理组（STZ+MCAO+EPC-EX）、EPC-EXmiR-17处理组（STZ+MCAO+EPC-EXmiR-17）。激光多普勒血流检测仪检测小鼠脑血流灌注，通过CD31抗体染色来检测脑微血管密度，利用2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色检测脑梗死面积，Longa 5分法评估小鼠神经功能缺损。（2）建立人脑微血管内皮细胞（HBMEC）高糖（hg）+缺氧复氧（H/R）损伤模型，将EPC-EX或EPC-EXmiR-17与细胞模型共培养，检测细胞功能变化。利用Annexin V/PI凋亡检测试剂盒结合流式细胞仪分析HBMEC凋亡情况；血管形成试剂盒检测HBMEC血管形成能力；划痕实验检测HBMEC迁移能力；CCK8法检测HBMEC增殖能力。采用GraphPad Prism 6软件进行统计学处理，符合正态分布的计量资料以xˉ±s表示，两两比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。结果:在糖尿病脑卒中小鼠模型中，EPC-EX能增加糖尿病脑卒中小鼠大脑微血管密度和脑血流灌注（P均＜0.01），减少梗死面积以及神经损伤评分（P均＜0.01），EPC-EXmiR-17作用效果更强（P均＜0.05）。在体外细胞实验中，EPC-EX显著改善hg及H/R损伤的HBMEC血管形成、增殖、迁移能力，抑制细胞凋亡（P均＜0.01）；EPC-EXmiR-17能够更好地改善HBMEC上述功能（P均＜0.05）。结论:EPC-EXmiR-17可能通过保护脑血管内皮细胞，改善脑血管功能，对糖尿病脑卒中发挥更好的治疗作用。

microRNA-17;内皮祖细胞;外泌体;糖尿病;缺血性脑卒中

马晓瑭;李婵娣;李嘉辉;许小冰

524001　广东湛江，广东医科大学附属医院神经病学研究所　广东省衰老相关心脑血管疾病重点实验室

中华脑血管病杂志（电子版）

[1]马晓瑭;李婵娣;李嘉辉;许小冰-.高表达microRNA-17的内皮祖细胞外泌体对糖尿病缺血性脑卒中的治疗作用)[J].中华脑血管病杂志（电子版）,2022(04):263-274

EPCmiR,EPCNC,EXmiR,STZ+MCAO,STZ+MCAO+EPC

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