典型文献
利用CRISPR/Cas9技术敲除K562细胞中的SMIM1基因
文献摘要：
目的 利用慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因编辑技术,在K562细胞系中敲除编码Vel血型抗原的SMIM1基因.方法 设计5条sgRNA序列,构建Cas9-sgRNA共表达质粒,在293T细胞中初步筛选切割效率较高的sgRNA序列.将筛选后的sgRNA通过第二代慢病毒包装系统包装慢病毒并感染K562细胞,提取细胞基因组DNA,进行Sanger测序和TA克隆检测.结果 使用易转染的293T细胞建立sgRNA的初步筛选平台,筛选出切割效率较高的sgRNA4序列.CRISPR/Cas9系统成功在K562细胞中SMIM1基因的sgRNA4识别位点发挥基因编辑活性.结论 证实了利用CRISPR/Cas9技术在K562细胞中敲除SMIM1基因的可行性,为构建Vel抗原表型阴性的细胞模型奠定基础,也为后续编辑其他血型抗原的基因提供实验依据.
文献关键词：
CRISPR/Cas9;Vel抗原;SMIM1基因;K562细胞系
中图分类号：
作者姓名：
杨佳璇;李明浩;李艾静;叶璐夷
作者机构：
200051 上海市血液中心输血研究所分子免疫血液学学科
文献出处：
引用格式：
[1]杨佳璇;李明浩;李艾静;叶璐夷-.利用CRISPR/Cas9技术敲除K562细胞中的SMIM1基因)[J].临床输血与检验,2022(01):22-28
A类：
SMIM1,Vel,sgRNA4
B类：
CRISPR,Cas9,敲除,K562,基因编辑技术,细胞系,血型抗原,共表达,质粒,293T,初步筛选,切割效率,第二代,慢病毒包装,包装系统,统包,Sanger,TA,克隆检测,转染,细胞模型,续编
AB值：
0.221786
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