目的 分析MNS血型相关基因GYPA、GYPBmRNA剪接体多态性,探讨各种剪接体编码的GPA和GPB蛋白异构体的亚细胞定位与MNS血型抗原表达的相关机理.方法 随机选取无偿献血者10份血液,提取外周血总mRNA,反转录为cDNA后,以巢式PCR方法扩增GYPA、GYPB基因的开放阅读框并进行Sanger测序,碱基序列与GYPA(NCBI:NM_002099)、GYPB(NCBI:NM_002100.5)比对.得到的GYPA、GYPB开放阅读框的野生型及各种剪接异构体编码序列后,通过融合PCR技术分别与绿色荧光蛋白(GFP)编码基因融合并克隆后转染到HEK293细胞进行过表达,通过聚焦激光扫描显微镜监测GPA-GFP和GPB-GFP融合荧光蛋白的亚细胞定位.结果 2例标本的GYPA mRNA中缺失外显子1与外显子2,预测的GPA蛋白异构体缺失2～26位氨基酸,GYPB mRNA全长序列完整.6例标本的GYPA mRNA完整,GYPB mRNA中缺失外显子2,预测的GPB蛋白异构体缺失13～45位氨基酸,其他外显子序列完整.1例标本的GYPA mRNA完整,GYPB mRNA的外显子5中364～385位碱基被AG替换,显示氨基酸信号肽截短.其他标本的GYPmRNA全长序列完整.GP-GFP融合蛋白的荧光信号的观察结果表明,根据各RNA剪接体克隆表达的GPA、GPB糖蛋白异构体均可表现出细胞膜表面定位分布,其中的一些可变剪接导致蛋白异构体发生不同程度的细胞内弥散,影响蛋白在细胞表面分布的速度和比例,可能构成MNS抗原强弱的原因之一.结论 GYP mRNA剪接体有明显多态性特征,但GYP mRNA的部分片段缺失不影响其编码的蛋白异构体在细胞表面的定位分布,能够确保其展示MNS抗原特性.

MNS血型抗原;GYP基因;mRNA可变剪接体;蛋白异构体

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[1]梁延连;梁燕文;林建梭;王红星;陈帅;徐筠娉-.GYP mRNA基因可变剪接对MNS血型糖蛋白GPA和GPB在细胞表面定位的影响)[J].中国输血杂志,2022(09):887-891

GYP,GYPA,GYPBmRNA,蛋白异构体,GYPB,GYPmRNA

MNS,糖蛋白,GPA,GPB,细胞表面,多态性,亚细胞定位,血型抗原,无偿献血者,cDNA,开放阅读框,Sanger,碱基序列,NCBI,NM,野生型,剪接异构体,编码序列,绿色荧光蛋白,GFP,编码基因,基因融合,转染,HEK293,过表达,激光扫描,扫描显微镜,外显子,全长,子序列,AG,信号肽,融合蛋白,荧光信号,克隆表达,细胞膜,弥散,分片,可变剪接体

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