目的 探究微小RNA(miRNA)-548a-3p对脂多糖(LPS)诱导的结肠上皮细胞的凋亡和炎症反应影响及其机制.方法 收集2019年1月至2020年5月于南方医科大学深圳医院就诊,经肠镜及病理学检查确诊为活动期溃疡性结肠炎35例患者的肠黏膜组织及正常肠道黏膜组织.取正常结肠上皮细胞分为6组:对照组不做任何处理;LPS组给予50μg/mL LPS处理;miR-NC组、miR-548-3p mimics组、miR-548-3p inhibitor组、miR-574-3p mimics+pcDNA3.1-toll样受体4(TLR4)组分别转染相应序列,随后使用等量LPS处理.实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-548a-3p表达,CCK-8法检测细胞增殖,酶联免疫吸附剂测定(ELISA)检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素8(IL-8)含量,双荧光素酶报告基因实验验证miR-548a-3p与TLR4的结合关系;Western blot实验检测TLR4、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因-相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸大冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达.结果 miR-548a-3p在溃疡性结肠炎患者肠黏膜组织中相对表达水平为(1.130±0.568),低于正常肠黏膜组织(1.684±0.733),差异有统计学意义(P<0.05);LPS组中miR-548a-3p表达水平为(0.463±0.042),低于对照组的(1.001±0.090),差异有统计学意义(P<0.05).转染后,miR-548a-3p inhibitor组中TNF-α、IL-8、细胞凋亡率、BAX表达和Caspase 3表达水平高于miR-NC组,而24小时和48小时细胞增殖水平低于miR-NC组,差异均有统计学意义(P<0.05).与miR-NC组相比,miR-548a-3pmimics组中含野生型TLR4荧光素酶活性降低(P<0.05).与miR-548a-3p mimics组相比,miR-574-3p mimics+pcDNA3.1-TLR4组TNF-α、IL-8、细胞凋亡率、BAX表达和Caspase 3表达水平较高,24小时和48小时细胞增殖水平较低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 miR-548a-3p可通过靶向TLR4抑制细胞凋亡和炎症因子分泌,并促进细胞增殖.

溃疡性结肠炎;细胞凋亡;微小RNA-548a-3p;toll样受体4

凌琳;游丽娟;袁葵

518000 广东深圳 南方医科大学深圳医院消化内科

安徽医学

[1]凌琳;游丽娟;袁葵-.miR-548a-3p调控TLR4抑制脂多糖诱导结肠上皮细胞的凋亡)[J].安徽医学,2022(08):906-911

548a,3pmimics

TLR4,脂多糖,结肠上皮细胞,miRNA,LPS,南方医科大学,肠镜,病理学检查,活动期溃疡性结肠炎,肠黏膜组织,肠道黏膜,NC,inhibitor,mimics+pcDNA3,toll,样受体,转染,等量,实时荧光定量聚合酶链反应,CCK,酶联免疫吸附,免疫吸附剂,白介素,双荧光素酶报告基因实验,blot,实验检测,细胞淋巴瘤,白血病,Bax,Caspase,溃疡性结肠炎患者,相对表达,低于正常,细胞凋亡率,BAX,野生型,荧光素酶活性

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