目的:探讨β-淀粉样蛋白1-42寡聚体(amyloidβ-protein 1-42 oligomer,oAβ)对BV2小胶质细胞炎症反应的影响及可能的机制.方法:制备oAβ,采用不同浓度(0、0.5、1、5、10、20μmol/L)的oAβ孵育BV2小胶质细胞24 h后,用倒置相差显微镜观察细胞形态变化;用CCK-8法检测BV2小胶质细胞活力;用ELISA法检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、IL-4和IL-10的分泌水平.随后将BV2小胶质细胞分成对照组、模型组和拮抗剂组,模型组选取浓度为5μmol/L的oAβ处理BV2小胶质细胞,拮抗剂组在模型组基础上加10μmol/L Toll样受体1(Toll-like receptor 1,TLR1)/TLR2拮抗剂CU-CPT22作用于细胞,应用RT-qPCR和Western blot检测3组细胞TLR1、TLR2、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)的mRNA和蛋白表达,用ELISA检测细胞培养上清液中TNF-α、IL-6、IL-4和IL-10的分泌水平.结果:BV2小胶质细胞的活力随着oAβ浓度的增加而降低,TNF-α和IL-6分泌水平随oAβ浓度的增加而升高,IL-4和IL-10分泌水平随oAβ浓度的增加而降低,且与0μmol/L oAβ组比较差异均有统计学意义(P<0.05).与对照组相比,模型组TLR1、TLR2和MyD88的mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.01),TNF-α和IL-6分泌水平显著升高(P<0.01),IL-4和IL-10分泌水平显著降低(P<0.01);与模型组相比,拮抗剂组TLR1、TLR2及MyD88 mRNA和蛋白表达均显著降低(P<0.05),TNF-α和IL-6分泌水平显著降低(P<0.01),IL-4和IL-10分泌水平无显著变化(P>0.05).结论:不同浓度的oAβ刺激BV2小胶质细胞后均出现了炎症反应,且oAβ呈浓度依赖性的升高了促炎细胞因子TNF-α和IL-6的表达水平,降低了抗炎细胞因子IL-4和IL-10的表达水平;oAβ可能通过TLR1/2-MyD88信号通路诱导BV2小胶质细胞活化,进而上调其促炎介质的水平.

阿尔茨海默病;β-淀粉样蛋白1-42寡聚体;小胶质细胞;TLR1/2-MyD88信号通路

湖北中医药大学中医临床学院,湖北武汉430065;武汉市第一医院神经内科,湖北武汉430022

[1]刘欣;王俊力;孙亦轩;张忠文;梅俊华;陈国华;邵卫-.β-淀粉样蛋白1-42寡聚体对BV2小胶质细胞炎症反应的影响及机制研究)[J].中国病理生理杂志,2022(06):986-992

CPT22

淀粉样蛋白,寡聚体,BV2,细胞炎症,amyloid,protein,oligomer,oA,孵育,倒置,相差显微镜,细胞形态,形态变化,CCK,细胞活力,细胞培养,养上,上清液,tumor,necrosis,interleukin,泌水,拮抗剂,Toll,样受体,like,receptor,TLR1,TLR2,CU,qPCR,blot,髓样分化因子,myeloid,differentiation,MyD88,蛋白表达水平,浓度依赖性,促炎细胞因子,抗炎细胞因子,小胶质细胞活化,阿尔茨海默病

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