典型文献
优化近乎PAM-less腺嘌呤碱基编辑器提升编辑效率
文献摘要：
目的 探究替换近乎PAM-less腺嘌呤碱基编辑器(ABE)不同元件对其编辑效率的影响.方法 在SpRY-ABEmax中,以Tad-8e替换ABEmax构建SpRY-ABE8e,在此基础上将Cas9蛋白变体SpRY与Tad-8e之间的连接肽3xGGS-XTEN-3xGGS改为长度缩短的PAPAPA连接肽.将ABEs和sgRNA表达质粒共转染人胚肾细胞HEK 293T,24 h后加入1.5μg/mL嘌呤霉素并于72 h后通过流式分选表达绿色荧光蛋白的细胞,提取细胞基因组并使用PCR扩增技术在预期产生编辑的位点进行扩增,采用Sanger测序并使用Beat工具预估各个位点编辑效率情况.结果 与对照组SpRY-ABEmax相比,SpRY-ABE8e编辑效率提升,编辑窗口也扩大(P<0.05);通过使用长度缩短的连接肽可以在保持编辑效率提升的同时限制SpRY-ABE8e的编辑窗口.结论 可通过替换PAM-less ABE不同元件来提升编辑效率,这将为今后基因治疗提供更多的工具选择.
文献关键词：
腺嘌呤碱基编辑器;SpRY;ABE8e;编辑效率
中图分类号：
作者姓名：
周小钰;王晓月
作者机构：
中国医学科学院基础医学研究所 北京协和医学院基础学院 生物化学与分子生物学系,北京100005
文献出处：
引用格式：
[1]周小钰;王晓月-.优化近乎PAM-less腺嘌呤碱基编辑器提升编辑效率)[J].基础医学与临床,2022(06):902-907
A类：
SpRY,ABEmax,Tad,ABE8e,3xGGS,XTEN,PAPAPA,ABEs
B类：
近乎,PAM,less,腺嘌呤碱基编辑器,编辑效率,上将,Cas9,变体,sgRNA,质粒,共转染,人胚,胚肾,肾细胞,HEK,293T,嘌呤霉素,过流,流式分选,绿色荧光蛋白,生编,Sanger,Beat,个位,时限,基因治疗,工具选择
AB值：
0.20347
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