典型文献
利用CRISPR/Cas9技术构建人MCT1基因敲除结肠癌RKO稳定细胞系及其生物学功能检测
文献摘要：
目的 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术在人结肠癌细胞系RKO中稳定敲除MCT1基因,并检测其生物学功能.方法 将CRISPRv2-MCT1-KO#1、CRISPRv2-MCT1-KO#2质粒转染至RKO细胞中,48 h后用含嘌呤霉素的培养液进行筛选,挑取单克隆细胞;利用Western blot和DNA测序技术检测MCT1基因表达情况;利用免疫荧光技术检测MCT1蛋白表达分布变化;通过乳酸试剂盒检测细胞内乳酸水平;通过细胞克隆形成实验以及CCK-8实验检测细胞增殖能力;通过GSEA软件分析MCT1基因在结肠癌中可能参与的信号通路.结果 CRISPRv2-MCT1-KO质粒成功构建;Western blot和DNA测序结果显示稳定敲除MCT1基因的人结肠癌RKO细胞构建成功;与对照组相比,MCT1基因敲除细胞的细胞膜上不能观察到MCT1蛋白,且细胞内乳酸水平明显降低(P<0.01);MCT1基因敲除后RKO细胞增殖能力明显减弱(P<0.01);GSEA分析显示,MCT1可能通过氧化磷酸化、MYC信号通路促进结肠癌发生发展.结论 通过CRISPR/Cas9技术成功构建MCT1基因稳定敲除的结肠癌RKO细胞系,可能成为研究MCT1基因在结肠癌发生发展中作用的有效工具.
文献关键词：
CRISPR/Cas9;MCT1;乳酸;细胞增殖
中图分类号：
作者姓名：
佘晓伟;孙黎;胡俊波;徐丰
作者机构：
华中科技大学同济医学院附属同济医院胃肠外科,武汉 430030
文献出处：
引用格式：
[1]佘晓伟;孙黎;胡俊波;徐丰-.利用CRISPR/Cas9技术构建人MCT1基因敲除结肠癌RKO稳定细胞系及其生物学功能检测)[J].华中科技大学学报（医学版）,2022(01):1-6
A类：
CRISPRv2,KO#1,KO#2
B类：
Cas9,技术构建,MCT1,基因敲除,RKO,稳定细胞系,生物学功能,基因编辑技术,人结肠癌细胞,质粒转染,嘌呤霉素,培养液,单克隆细胞,blot,免疫荧光技术,表达分布,试剂盒,过细,细胞克隆形成,CCK,实验检测,细胞增殖能力,GSEA,细胞膜,氧化磷酸化,MYC
AB值：
0.168596
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