典型文献
人/猪SERPING1同源性比较及猪SERPING1敲除细胞系的建立
文献摘要：
目的 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立SERP-ING1-/-猪胎儿成纤维细胞(PFFs)系,为构建遗传性血管性水肿模型提供细胞实验材料.方法 首先比较人/猪SERP-ING1氨基酸同源性.其次,分析猪SERPING1基因有效的编码区,据此选择第八外显子为敲除靶点,设计并合成靶向猪SERPING1的单导向RNA(sgRNA),连接到含有Cas9核酸内切酶的pX330载体上,构建SERPING1打靶载体pX330sgRNA,将其转染至猪胎儿成纤维细胞中,G418药物筛选阳性单克隆细胞.最后,用T7 E1酶切实验检测靶点编辑情况,测序验证单克隆细胞基因型.结果 生物信息学分析结果提示人/猪SERPING1蛋白氨基酸同源性较高,氨基酸比对相似性达到65.87％.成功构建打靶SERPING1的载体,并转染到细胞,药物筛选获得SERPING1基因敲除的单克隆细胞,测序确认了突变的基因型.结论 人/猪SERP-ING1蛋白同源性较高,适合用于构建遗传性血管性水肿模型.构建的Cas9/sgRNA表达载体实现了SERPING1基因编辑,获得基因敲除的单细胞克隆,为后续SERPING1-/-猪模型的构建提供了必需的实验材料.
文献关键词：
SERPING1;CRISPR/Cas9;猪胎儿成纤维细胞
中图分类号：
作者姓名：
王蒙;朱晓晗;刘晓蕊;李琳;王盈;杨海元;戴一凡
作者机构：
南京医科大学医学遗传学系,江苏省异种移植重点实验室,南京 211166
文献出处：
引用格式：
[1]王蒙;朱晓晗;刘晓蕊;李琳;王盈;杨海元;戴一凡-.人/猪SERPING1同源性比较及猪SERPING1敲除细胞系的建立)[J].安徽医科大学学报,2022(04):505-509
A类：
SERP,ING1,敲除靶点,pX330sgRNA
B类：
SERPING1,同源性比较,敲除细胞系,CRISPR,Cas9,基因编辑技术,猪胎儿成纤维细胞,PFFs,遗传性血管性水肿,细胞实验,实验材料,编码区,第八,外显子,并合,接到,核酸内切酶,打靶,转染,G418,药物筛选,单克隆细胞,T7,E1,实验检测,基因型,生物信息学分析,示人,基因敲除,表达载体,单细胞,细胞克隆
AB值：
0.235439
相似文献
机标中图分类号，由域田数据科技根据网络公开资料自动分析生成，仅供学习研究参考。
