蛇毒血凝酶类药物是以蝮蛇蛇毒为原料制备的止血药,主要活性成分为蛇毒类凝血酶(svTLEs).不同蛇种来源的svTLEs结构不同,止血机制不同,药理作用也存在差异,因此准确鉴别蛇毒种属来源和svTLEs含量对于保障该类产品的质量至关重要.研究基于蛋白质组学技术,筛选出了具有种属特异性的矛头蝮蛇svTLE特征肽,并建立了基于特征肽的超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)检测矛头蝮蛇蛇毒种属来源及类凝血酶含量的方法.采用胰蛋白酶对纯化的矛头蝮蛇svTLE进行酶解,利用纳升液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(Nano LC-Q-Exactive-MS)和Proteome Discoverer 2.2软件分别进行多肽的检测和鉴定,通过BLAST搜索与Uniprot数据库对比分析,筛选出具有种属特异性的矛头蝮蛇svTLEs特征肽"EAYNGLPAK".针对该特征肽对酶解温度、酶解时间和酶用量等样品前处理方法进行了优化,利用超高效液相色谱-串联质谱,以m/z 481.9>315.2和481.9>485.2作为检测离子对,采用ESI+模式进行了多反应监测(MRM)定性定量分析.结果显示,特征肽在2.5～30 ng/mL范围内线性关系良好,相关系数(r)大于0.9996,多水平加标回收率范围为95.5％～101.9％,各水平平行测定结果的相对标准偏差(RSD)为1.1％～3.2％,完全能够满足实际样品检测需求.方法简便快捷,灵敏度高,专属性强,可用于矛头蝮蛇蛇毒种属鉴别及svTLE含量测定,从源头保证血凝酶类产品的质量,并可为其他蛇毒类产品的质量控制提供参考.

超高效液相色谱-串联质谱;特征肽;蛇毒类凝血酶;矛头蝮蛇;蛇毒

咸瑞卿;杭宝建;巩丽萍;王聪聪;张迅杰;彭丽;石峰

山东省食品药品检验研究院,国家药品监督管理局仿制药研究与评价重点实验室,山东 济南250101;山东大学药学院,山东 济南250012;华润双鹤利民药业(济南)有限公司质量部,山东 济南250200

色谱

[1]咸瑞卿;杭宝建;巩丽萍;王聪聪;张迅杰;彭丽;石峰-.基于特征肽的超高效液相色谱-串联质谱法检测矛头蝮蛇蛇毒种属来源及类凝血酶含量)[J].色谱,2022(09):810-816

蛇毒类凝血酶,svTLEs,svTLE,EAYNGLPAK

特征肽,超高效液相色谱,串联质谱法,矛头蝮蛇,毒种,酶含量,蛇毒血凝酶,酶类,原料制备,止血药,主要活性成分,止血机制,药理作用,类产品,蛋白质组学技术,有种,UHPLC,胰蛋白酶,四极,静电场轨道阱高分辨质谱,Nano,Exactive,Proteome,Discoverer,多肽,BLAST,Uniprot,酶解温度,酶解时间,酶用量,样品前处理方法,离子对,ESI+,多反应监测,MRM,定性定量分析,内线,加标回收率,平平,平行测定,测定结果,相对标准偏差,RSD,全能,样品检测,灵敏度高,专属性,种属鉴别,含量测定

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