典型文献
刚地弓形虫抗缓殖子期抗原1单克隆抗体的制备与应用
文献摘要：
目的 制备弓形虫抗缓殖子期抗原1(BAG1)的单克隆抗体,探究其在弓形虫缓殖子鉴定上的应用.方法 分别收集碱性培养基(pH 8.2)诱导5d后的弓形虫ME49虫株(体外诱导)和慢性感染后2个月的小鼠脑组织匀浆中的ME49虫株(体内形成).提取体外诱导的弓形虫ME49虫株缓殖子总RNA,RT-PCR扩增bagl开放读码框片段,亚克隆至原核表达载体pET-28a(+),转化至BL21(DE3)大肠埃希菌,用1mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达BAG1,采用Ni-NTA柱纯化重组蛋白,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测重组蛋白BAG1表达情况.取6只BALB/c小鼠,皮下注射纯化的重组BAG1蛋白(20 pig/鼠)3次后(首次免疫用弗氏完全佐剂,后两次免疫用等量弗氏不完全佐剂,每隔2周免疫1次),选择血清抗体效价高的小鼠,取脾组织分离脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合后,用纯化的BAG1蛋白经间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞,经多次亚克隆筛选稳定分泌抗BAG1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,收集培养上清,间接ELISA法检测抗体效价和抗体亚型.取BALB/c小鼠4只,液体石蜡腹腔注射(0.5 ml/鼠)1周后,腹腔注射单克隆杂交瘤细胞106个/鼠,2周后收集腹水,亲和色谱法纯化抗BAG1的单克隆抗体.制备体外诱导和体内形成的弓形虫裂解蛋白,以纯化后的抗BAG1单克隆抗体为一抗,蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测ME49虫株中BAG1蛋白的表达情况,间接免疫荧光试验(IFA)检测ME49虫株缓殖子情况.结果 RT-PCR扩增获得bag1的开放读码框片段,长690 bp,编码229个氨基酸.重组质粒pET-28a(+)-bagl经菌落PCR和测序后鉴定正确.SDS-PAGE结果显示,重组BAG1蛋白相对分子质量(M,)约为27 000,以可溶性蛋白和包涵体形式表达.间接ELISA检测结果显示,纯化的BAG1蛋白免疫小鼠3次后,血清抗体平均效价可达1:102 400.融合筛选获得4株阳性单克隆杂交瘤细胞株,分别为mAblH03、mAb4B04、mAb5H07、mAb8B12,以mAb4B04单克隆抗体效价最高,达1∶25 600,该抗体亚型为IgG1型.Western blotting结果显示,mAb4B04单克隆抗体可识别体外诱导和体内形成的ME49虫株BAG1蛋白.IFA结果显示,mAb4B04单克隆抗体可检测到体外诱导和体内形成的ME49虫株缓殖子.结论 制备了抗弓形虫BAG1的单克隆抗体,其中效价最高的mAb4B04单克隆抗体能特异性识别弓形虫ME49虫株的BAG1蛋白和缓殖子.
文献关键词：
刚地弓形虫;缓殖子期抗原1;克隆;表达;单克隆抗体
中图分类号：
作者姓名：
邹伟浩;吴蔚玲;廖远鹏;陈敏;彭鸿娟
作者机构：
南方医科大学公共卫生学院病原生物学系,广东省热带病研究重点实验室,广州 510515
文献出处：
引用格式：
[1]邹伟浩;吴蔚玲;廖远鹏;陈敏;彭鸿娟-.刚地弓形虫抗缓殖子期抗原1单克隆抗体的制备与应用)[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志,2022(05):587-593
A类：
ME49,bagl,bag1,mAblH03,mAb4B04,mAb5H07,mAb8B12
B类：
刚地弓形虫,单克隆抗体的制备,制备与应用,BAG1,别收,5d,体外诱导,慢性感染,小鼠脑组织,匀浆,读码,亚克,原核表达载体,pET,28a,BL21,DE3,大肠埃希菌,1mmol,异丙基,半乳糖,糖苷,IPTG,诱导表达,NTA,重组蛋白,十二烷基硫酸钠,聚丙烯酰胺凝胶电泳,SDS,PAGE,BALB,皮下注射,pig,弗氏完全佐剂,等量,每隔,血清抗体,抗体效价,价高,脾组织,组织分离,脾细胞,SP2,骨髓瘤细胞,细胞融合,杂交瘤细胞株,养上,上清,检测抗体,抗体亚型,液体石蜡,腹腔注射,ml,腹水,亲和色谱,裂解蛋白,蛋白质免疫印迹,blotting,间接免疫荧光试验,IFA,bp,重组质粒,菌落,白相,相对分子质量,可溶性蛋白,包涵体,IgG1,别体,特异性识别,和缓
AB值：
0.229011
相似文献
机标中图分类号，由域田数据科技根据网络公开资料自动分析生成，仅供学习研究参考。
