典型文献
利用CRISPR/Cas9在人类黑色素瘤细胞中编辑MC1R与功能分析
文献摘要:
MC1R(melanocortin 1 receptor)基因编码黑皮质素1型受体,它在配体α-黑素细胞刺激素(α-melanocyte stimulating hormone,α-MSH)的刺激下,可促进细胞内cAMP(cyclic adenosine monophosaphate)的生成,从而激活PKA(protein kinase A system)信号通路,促进黑色素合成调控的关键转录因子–小眼畸形相关转录因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF),以及限速酶–酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)的表达,进而调控真黑素和褐黑素的合成,影响动物的毛色表型.有研究表明,杜洛克猪(Susscrofa domestica)MC1R蛋白第6个跨膜结构域(transmembrane domain 6,TM6)发生了A243T突变,该突变可能影响MC1R蛋白生物学功能,被认为是导致杜洛克猪红毛表型的主要因素,然而却一直未被验证过.因此,本研究以单链寡核苷酸(single-stranded oligo-deoxyribonucleotides,ssODN)作为同源重组模板,利用CRISPR/Cas9技术在人类黑色素瘤细胞系SK-MEL-2中引入MC1R基因的c.727G>A(A243T)突变,以分析其对MC1R功能的影响.结果表明ssODN发生同源重组的效率可达10%.通过对共转染ssODN和CRISPR/Cas9表达载体的细胞进行筛选和培养,获得6个单克隆细胞株,进行测序鉴定,结果未能筛选到发生预期突变的单克隆细胞株,所有单克隆细胞株皆在目标位点周围出现突变.对转染后的细胞群进行功能分析,结果发现其cAMP信号强度、MITF基因和TYR基因表达量均显著低于未转染的细胞,表明编辑MC1R可影响细胞的黑色素合成功能.本研究为深入分析MC1R突变影响动物毛色提供了进一步的参考.
文献关键词:
MC1R;基因定点突变;CRISPR/Cas9;A243T
中图分类号:
作者姓名:
张充;魏子璇;王敏;陈瑶生;何祖勇
作者机构:
中山大学生命科学学院,有害生物控制与资源利用国家重点实验室,广州 510006
文献出处:
引用格式:
[1]张充;魏子璇;王敏;陈瑶生;何祖勇-.利用CRISPR/Cas9在人类黑色素瘤细胞中编辑MC1R与功能分析)[J].遗传,2022(07):581-590
A类:
monophosaphate,Susscrofa,A243T,deoxyribonucleotides,ssODN,727G
B类:
CRISPR,Cas9,类黑色素,黑色素瘤细胞,MC1R,功能分析,melanocortin,receptor,基因编码,黑皮,皮质素,黑素细胞,刺激素,melanocyte,stimulating,hormone,MSH,cAMP,cyclic,adenosine,PKA,protein,kinase,system,黑色素合成,合成调控,关键转录因子,小眼畸形,形相,microphthalmia,associated,transcription,MITF,限速酶,酪氨酸酶,tyrosinase,TYR,响动,毛色,杜洛克猪,domestica,跨膜结构域,transmembrane,domain,TM6,生物学功能,猪红,红毛,单链,寡核苷酸,single,stranded,oligo,同源重组,细胞系,SK,MEL,共转染,表达载体,单克隆细胞,细胞株,目标位,信号强度,基因表达量,变影,基因定点突变
AB值:
0.393006
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