典型文献
单核细胞增生李斯特菌RsbS蛋白的抗应激机制作用研究
文献摘要:
为了研究单核细胞增生李斯特菌(Lm)RsbS蛋白的抗应激机制,本研究设计针对rsbS基因完整ORF的引物,PCR扩增rsbS基因,构建重组表达质粒pET-30a-rsbS,转化至表达菌株Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导培养后SDS-PAGE检测,结果显示获得18.8 ku带His标签的重组RsbS蛋白,利用His-Ni纯化柱纯化重组RsbS蛋白,得到浓度约1 μg/mL的纯化蛋白.以纯化的重组RsbS蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,经间接ELISA测定抗体效价为1∶128 000;经western blot检测RsbS多克隆抗体具有良好的反应原性.通过等温滴定量热试验检测与RsbS互作的蛋白,结果显示RsbS与其上游RsbR蛋白存在体外互作.将Lm野生株10403S和缺失株△rsbR分别接种至BHI液体培养基和含5%NaCl的BHI应激培养基培养后,分别采用荧光定量PCR和western blot对rsbS的转录和表达水平进行分析,结果显示经5%NaCl应激30 min后,野生株中rsbS的转录和表达水平增高,而缺失株中rsbS的转录和表达水平均降低.综上,本研究首次证实RsbS通过与RsbR蛋白互作参与Lm的抗应激反应.本研究为进一步揭示RsbS蛋白的生物学功能及Lm的抗应激机制研究奠定基础.
文献关键词:
单核细胞增生李斯特菌;RsbS;抗应激;蛋白互作
中图分类号:
作者姓名:
夏叶;李春华;孙莹慧;朱永军;缪德年;辛永萍
作者机构:
上海市农业科学院畜牧兽医研究所,上海 201106;浙江大学医学院附属第二医院,浙江 杭州 310009
文献出处:
引用格式:
[1]夏叶;李春华;孙莹慧;朱永军;缪德年;辛永萍-.单核细胞增生李斯特菌RsbS蛋白的抗应激机制作用研究)[J].中国预防兽医学报,2022(01):66-72
A类:
RsbS,rsbS,RsbR,rsbR
B类:
单核细胞增生李斯特菌,抗应激,Lm,ORF,引物,重组表达,质粒,pET,30a,Rosetta,DE3,IPTG,诱导培养,SDS,PAGE,ku,His,多克隆抗体,抗体效价,western,blot,反应原性,等温滴定量热,热试验,试验检测,野生株,10403S,缺失株,BHI,液体培养基,NaCl,蛋白互作,应激反应,生物学功能
AB值:
0.222925
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