探究白藜芦醇(RES)预处理通过微小RNA-20b-5p(miR-20b-5p)抑制基质相互作用分子2(STIM2)改善线粒体的功能减轻心肌缺血再灌注(IR)损伤的作用机制.将90只大鼠随机分成假手术(sham)组、模型(IR)组、IR+RES组(50 mg·kg-1 RES)、IR+RES+antagomir NC 组(50 mg·kg-1 RES+80 mg·kg-1 antagomir NC)、IR+RES+miR-20b-5p antagomir 组(50 mg·kg-1 RES+80 mg·kg-1 miR-20b-5p antagomir),每组18只.使用冠状动脉左前降支结扎法建立IR大鼠模型,术前2周IR+RES组大鼠腹腔注射50 mg·kg-1 RES,sham组、IR组注射等剂量生理盐水,每日1次.超声仪检测各组大鼠左室舒张末期内径(LVIDd)、左心室收缩末期内径(LVIDs);2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)法及苏木精-伊红(HE)染色法分别检测心肌梗死面积及组织病理学情况;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测心肌组织miR-20b-5p表达.通过氧糖剥夺/复氧(OGD/R)构建H9c2心肌细胞OGD/R模型;CCK-8法检测H9c2细胞活力;H9c2细胞分为空白(control)组、OGD/R组、OGD/R+RES组(25 μmol·L-1)、OGD/R+RES+inhibitor NC 组、OGD/R+RES+miR-20b-5p inhibitor 组、mimic NC 组、miR-20b-5p mimic 组、inhibitor NC组、miR-20b-5p inhibitor组;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot法检测细胞B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、cleaved-半胱氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase 3)、STIM2表达;根据线粒体膜电位(MMP)检测试剂盒、活性氧(ROS)检测试剂盒、三磷酸腺苷(ATP)测定试剂盒分别检测MMP、ROS、ATP水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-20b与STIM2靶向关系.与sham组相比,IR组心肌梗死面积、LVIDd、LVIDs、心肌组织病理程度显著增加,miR-20b-5p表达显著降低(P＜0.05);与IR组相比,IR+RES组心肌梗死面积、LVIDd、LVIDs、心肌组织病理程度显著降低,miR-20b-5p表达显著增加(P＜0.05);与IR+RES组相比,IR+RES+miR-20b-5p antagomir组心肌梗死面积、LVIDd、LVIDs、心肌组织病理程度显著增加,miR-20b-5p表达显著降低(P＜0.05).与control组相比,OGD/R组H9c2细胞活力显著下降(P＜0.05),H9c2细胞凋亡率、Bax和cleaved-caspase 3表达、ROS水平显著增加,Bcl-2表达、MMP、ATP水平显著降低(P＜0.05);与OGD/R组相比,OGD/R+RES组(25、50、100 μmol·L-1)细胞活力显著增加(P＜0.05),细胞凋亡率、Bax和cleaved-caspase 3表达、ROS水平显著降低,Bcl-2表达、MMP、ATP 水平显著增加(P＜0.05);与 OGD/R+RES 组相比,OGD/R+RES+miR-20b-5p inhibitor 组细胞凋亡率、Bax 和cleaved-caspase 3表达、ROS水平显著增加,Bcl-2表达、MMP、ATP水平显著降低(P＜0.05);miR-20b-5p与STIM2存在靶向关系;与 mimic NC 组相比,miR-20b-5p mimic 组 STIM2 表达显著降低(P＜0.05);与 inhibitor NC 组相比,miR-20b-5p inhibitor 组STIM2表达显著增加(P＜0.05).RES预处理可通过促进miR-20b-5p表达来抑制STIM2表达,以此改善线粒体的功能,减轻心肌IR损伤.

白藜芦醇;微小RNA-20b-5p;基质相互作用分子2;缺血再灌注;线粒体

李静;段群军;沈健

浙江大学医学院附属第二医院心血管内科,浙江杭州310003;浙江大学医学院附属第二医院心脏大血管外科,浙江杭州310003

中国中药杂志

[1]李静;段群军;沈健-.白藜芦醇预处理促进miR-20b-5p抑制STIM2改善线粒体的功能减轻心肌缺血再灌注损伤)[J].中国中药杂志,2022(18):4987-4995

STIM2,IR+RES,IR+RES+antagomir,RES+80,IR+RES+miR,R+RES,R+RES+inhibitor,R+RES+miR

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