为探究布鲁氏菌(Brucella)外膜蛋白Omp10对小鼠骨髓源性巨噬细胞(BMDM)极化及STAT6信号通路的影响,本研究将重组菌pET30a-Omp10/DE3经终浓度0.1 mmol/L的IPTG诱导6 h后,获得主要以包涵体形式表达的重组蛋白Omp10(rOmp10).同时,通过巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)刺激BALB/c小鼠胫骨和腓骨细胞获得本实验用的梭型、圆形或卵圆形"煎蛋样"形态的BMDM细胞.将获得的rOmp10纯化后刺激BMDM细胞,收集刺激后不同时间点细胞,提取基因组后通过qRT-PCR检测M1型巨噬细胞标志因子NOS2、IL-12,及M2型巨噬细胞标志因子JAK1、STAT6、ARG1、IL-10 mRNA的转录水平,结果显示,相对于对照组,rOmp10刺激细胞4 h和12 h后,NOS2和IL-12 mRNA转录水平显著上调,刺激12 h时JAK1 mRNA转录水平显著下调(P<0.05),刺激4 h、12 h和48 h时STAT6 mRNA转录水平均显著下调(P<0.05),ARG1和IL-10 mRNA转录水平逐渐升高而后降低.通过流式细胞术检测BMDM中M1型标记分子CD86和M2型标记分子CD206的表达情况,结果显示,在rOmp10刺激下CD86表达量极显著高于对照组(P<0.01),且随时间延长其表达量呈下降趋势;CD206在刺激12 h时显著低于对照组(P<0.05),但72 h时显著高于对照组,且随时间延长其表达量呈上升趋势(P<0.01).进一步通过ELISA方法检测刺激后不同时间的BMDM中细胞因子TNF-α和IL-10的表达量,结果显示,在rOmp10刺激BMDM 4 h、12 h、24 h时TNF-α表达量极显著高于对照组(P<0.01);而在rOmp10刺激BMDM 48 h时,IL-10的表达量显著高于对照组(P<0.05).上述结果首次证实布鲁氏菌外膜蛋白Omp10抑制巨噬细胞中STAT6信号通路的激活,且在外膜蛋白Omp10刺激前期主要诱导巨噬细胞极化为M1型,在感染后期诱导M2型细胞因子的表达,本研究为阐明布鲁氏菌胞内存活机制提供新的研究方向和实验基础.

布鲁氏菌;蛋白纯化;巨噬细胞极化

席静;王月丽;易继海;邓肖玉;张欢;王勇;孟闯;苗玉和;陈创夫

石河子大学动物科技学院,新疆 石河子 832000;人兽共患传染性疾病防治协同创新中心,新疆 石河子 832000;江苏省人兽共患病学重点实验室,江苏 扬州 225009;福建省生物科技有限公司,福建 福州 350000

中国预防兽医学报

[1]席静;王月丽;易继海;邓肖玉;张欢;王勇;孟闯;苗玉和;陈创夫-.布鲁氏菌Omp10对巨噬细胞极化及STAT6信号通路影响的研究)[J].中国预防兽医学报,2022(11):1156-1161

Omp10,rOmp10

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