[背景]副猪嗜血杆菌可引起多种炎性反应和较高死亡率,其致炎机制目前尚不清楚.[目的]探究副猪嗜血杆菌外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)诱导RAW264.7细胞caspase-11及NLRP3炎性体活化的功能,以及caspase-11在OMVs活化炎性体诱导炎性因子表达过程中的关键作用.[方法]副猪嗜血杆菌OMVs感染RAW264.7细胞,收集6、12和24h细胞,RT-PCR 检测 caspase-11、NLRP3、ASC 和 caspase-1 mRNA 的表达;收集感染后 48 h 细胞,Western blotting 检测 caspase-11、NLRP3、ASC 和 caspase-1 蛋白表达.收集感染后 6、12、24、48 和 72 h细胞上清,ELISA检测interleukin(IL)-1β和IL-18表达水平;不同浓度OMVs(0、2.5、10、25、50和100μg/mL)感染RAW264.7细胞24 h,ELISA检测上清中IL-1β和IL-18水平.构建caspase-11沉默RAW264.7细胞株,收集OMVs感染后12、24和48 h细胞培养上清检测IL-1β和IL-18水平.[结果]Caspase-11 mRNA转录水平在OMVs感染6、12和24 h均极显著高于对照组(P＜0.01);NLRP3 mRNA转录水平在感染后6、24 h极显著高于对照组(P＜0.01);ASC mRNA转录水平在感染后12、24 h显著低于对照组(P＜0.05);caspase-1 mRNA转录水平在感染后6、12和24 h显著高于对照组(P＜0.05).Western blotting结果显示,与空白对照组相比,OMVs组caspase-11、NLRP3、ASC和caspase-1蛋白表达均明显升高.OMVs感染RAW264.7细胞后12、24、48和72 h,IL-1β表达量极显著高于对照组(P＜0.01),而且呈现时间依赖性升高,IL-18表达水平在感染后6、12、24、48和72 h显著高于对照组(P＜0.05);不同浓度OMVs感染细胞时,OMVs对细胞的致炎作用呈现剂量依赖性增强.Caspase-11沉默后,IL-1β 水平在感染后12、24和48 h显著低于未沉默组;Caspase-11沉默组IL-18表达量在感染后24、48 h均显著低于未沉默组(P＜0.05).[结论]副猪嗜血杆菌OMVs在副猪嗜血杆菌诱导的炎症反应中发挥重要作用,OMVs可诱导RAW264.7细胞caspase-11介导的非经典NLRP3炎性体信号通路活化.

副猪嗜血杆菌;外膜囊泡;caspase-11;NLRP3炎性体;IL-1p;IL-18

李艳;杨君;翟少伦;楚品品;卞志标;张昆丽;李春玲

广东省农业科学院动物卫生研究所,广东广州510640;广东省畜禽疫病防治研究重点实验室,广东广州510640;农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站,广东广州510640;岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心,广东茂名525000

微生物学通报

[1]李艳;杨君;翟少伦;楚品品;卞志标;张昆丽;李春玲-.副猪嗜血杆菌外膜囊泡激活caspase-11和NLRP3炎性体诱导炎性细胞因子IL-1β和IL-18分泌)[J].微生物学通报,2022(12):5171-5183

副猪嗜血杆菌,外膜囊泡,caspase,NLRP3,炎性体,炎性细胞因子,炎性反应,outer,membrane,vesicles,OMVs,RAW264,炎性因子,24h,ASC,blotting,上清,interleukin,细胞株,细胞培养,养上,Caspase,转录水平,空白对照,时间依赖性,剂量依赖,量依赖性,非经典,1p

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