典型文献
羊口疮病毒F1L蛋白对山羊痘病毒黏附BHK21细胞的影响
文献摘要：
以提取羊口疮痂皮中病毒的DNA为模板,用PCR扩增羊口疮病毒(ORFV)的059基因序列,并进行基因克隆、测序鉴定和生物信息学分析;优化合成059基因编码序列,连接载体pET42a(+),转化Escherichia coli BL21(DE3);用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导阳性克隆菌,采用免疫印迹检测表达的F1L蛋白,并以His柱纯化蛋白、梯度法复性及Bradford法测定蛋白浓度;将BHK21细胞铺于12孔板中培养至单层,分别作F1L蛋白、山羊痘病毒(GTPV)、先蛋白后病毒、蛋白和病毒混液4种方式孵育,利用荧光定量PCR测定孵育至1.0、6.0 h的细胞黏附GTPV的量,研究ORFV F1L蛋白对GTPV黏附BHK21细胞的影响.结果表明:成功获得了ORFV重庆石柱分离株(ORFV–CQsz)的059基因编码序列,其编码的F1L蛋白包含1个结合细胞表面硫酸乙酰肝素受体的结构域,显示出肝素结合活性;该蛋白羧基端有2个跨膜区,不利于蛋白质的表达,但优化DNA序列构建的重组质粒菌,经IPTG诱导后获得对F1L蛋白的高效表达;免疫印迹显示F1L蛋白对ORFV抗体有较好的反应原性;Bradford法测定的纯化复性的F1L蛋白质量浓度为1.06 mg/mL;荧光定量PCR检测数据显示,不同孵育处理下GTPV黏附细胞的拷贝数不同,表明F1L蛋白对GTPV黏附BHK21细胞呈现一定的干扰作用,能降低病毒黏附到细胞的拷贝数.
文献关键词：
羊口疮病毒;F1L蛋白;山羊痘病毒;BHK21细胞;黏附
中图分类号：
作者姓名：
杨柳;许国洋;牟豪;白运川;余远迪
作者机构：
重庆市畜牧科学院,重庆 402460;重庆市兽用生物制品工程技术研究中心,重庆 402460;重庆酉阳土家族苗族自治县畜牧产业发展中心,重庆 409812
文献出处：
引用格式：
[1]杨柳;许国洋;牟豪;白运川;余远迪-.羊口疮病毒F1L蛋白对山羊痘病毒黏附BHK21细胞的影响)[J].湖南农业大学学报（自然科学版）,2022(01):95-102
A类：
pET42a,CQsz
B类：
羊口疮病毒,F1L,山羊痘病毒,BHK21,疮痂,ORFV,基因序列,基因克隆,生物信息学分析,优化合成,基因编码,编码序列,Escherichia,coli,BL21,DE3,异丙基,半乳糖,糖苷,IPTG,免疫印迹,His,梯度法,Bradford,蛋白浓度,孔板,GTPV,孵育,细胞黏附,石柱,分离株,白包,细胞表面,硫酸乙酰肝素,结构域,结合活性,羧基端,重组质粒,高效表达,反应原性,检测数据,拷贝数,附到
AB值：
0.255122
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