旨在探索长链非编码Tubb4b基因(lncRNA-Tubb4b)是否具有蛋白编码能力及其对Tubb4b基因的调控作用.本研究在lncRNA-Tubb4b中添加起始密码子ATG、0/1/2个的T尾和Flag标记,通过构建载体、脂质体转染和Western blot等技术对lncRNA-Tubb4b蛋白编码能力进行分析;随后,构建过表达载体和合成siRNA,通过脂质体转染和实时荧光定量PCR等技术检测lncRNA-Tubb4b对微管基因Tubb4b的影响.结果 表明,我们扩增了添加0、1和2个T尾的Flag片段,其与lncRN A-T ubb4b融合后,成功构建到pcDNA3.1(-)载体中;转染小鼠精原细胞后发现,添加0、1和2个T尾的lncRNA-Tubb4b均没有FLAG蛋白条带;以pcDNA 3.1(-)-EGFP载体为对照,在小鼠精原细胞中过表达lncRNA-Tubb4b时,对照组细胞有荧光产生,试验组Tubb4b基因的mRNA表达水平极显著地降低(P＜0.01);在小鼠精原细胞中干扰lncRNA-Tubb4b表达后,极显著地提高Tubb4b基因的mRNA表达水平(P＜0.01).这表明,lncRN A-T ubb4b确实不编码蛋白质,过表达或干扰lncRNA-Tubb4b的表达会极显著地降低或升高Tubb4b基因的表达.

lncRNA-Tubb4b;微管;Tubb4b;蛋白编码;小鼠

冯美莹;卫恒习;李莉;张守全

肇庆学院生命科学学院,肇庆526061;华南农业大学动物科学学院国家生猪种业工程技术研究中心广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室,广州510642

畜牧兽医学报

[1]冯美莹;卫恒习;李莉;张守全-.初探lncRNA-Tubb4b的蛋白编码能力及其对微管基因的调控)[J].畜牧兽医学报,2022(01):179-187

Tubb4b,ubb4b

lncRNA,蛋白编码,编码能力,微管,长链非编码,密码子,ATG,Flag,脂质体转染,blot,过表达载体,siRNA,pcDNA3,精原细胞,FLAG,白条,条带,EGFP,编码蛋白

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