[目的]试验旨在探究circRNA-Zfp609调节C2C12成肌细胞增殖和分化的潜在分子机制.[方法]利用RT-PCR和测序分析小鼠骨骼肌组织和C2C12成肌细胞中circRNA-Zfp609的表达,实时荧光定量PCR检测小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、小肠、骨骼肌组织及增殖12、24、36、48 h和分化0、1、3、5 d的C2C12成肌细胞中circRNA-Zfp609的相对表达量;实时荧光定量PCR检测分化0、1、3、5 d的C2C12成肌细胞中肌细胞生成素(MyoG)和肌球蛋白重链(MyHC)的相对表达量.用circRNA-Zfp609的干扰表达载体(siRNA)干扰细胞,通过CCK-8测定siRNA对C2C12成肌细胞增殖率的影响;用实时荧光定量PCR检测siRNA干扰对circRNA-Zfp609、MyoG和MyHC相对表达量的影响.通过TargetScan 7.0和miRDB软件预测circRNA-Zfp609上与肌肉分化相关的miRNA位点,将筛选的miRNAs的过表达载体转染HEK293T细胞,利用双荧光素酶报告试验验证circRNA-Zfp609 与 miRNA 的互作关系.根据 miRNAs 对 circRNA-Zfp609 的互作,构建 circRNA-Zfp609 的野生型和突变型载体并转染HEK293T细胞,利用双荧光素酶报告试验验证circRNA-Zfp609对miRNA的靶向关系.[结果]PCR和测序结果表明,小鼠骨骼肌中可表达circRNA-Zfp609;circRNA-Zfp609在小鼠骨骼肌中表达水平最高,在其他组织中的表达量由高到低依次是肾脏、肺脏、心脏、肝脏、胃、脾脏和小肠.与12 h相比,在C2C12成肌细胞增殖的36和48 h circRNA-Zfp609的相对表达量显著增加(P＜0.05);与分化第0天相比,在C2C12成肌细胞分化的第1、3和5天circRNA-Zfp609的相对表达量均显著增加(P＜0.05),MyoG、MyHC的相对表达量均极显著增加(P＜0.01).与NC组相比,siRNA组C2C12成肌细胞的增殖率和circRNA-Zfp609相对表达量均极显著降低(P＜0.01),MyoG 和 MyHC 的相对表达量显著降低(P＜0.05).circRNA-Zfp609 上有 miR-150-5p、miR-327、miR-344g-3p和miR-615-5p 4种与肌肉分化相关的miRNAs.circRNA-Zfp609与miR-615-5p的吸附能力最强,具有靶向结合作用.circRNA-Zfp609可以作为分子海绵与调控肌肉分化相关的miR-615-5p相互作用.[结论]circRNA-Zfp609在小鼠的组织中广泛表达,在骨骼肌中表达水平最高;circRNA-Zfp609在C2C12成肌细胞增殖和分化的不同时期差异表达,circRNA-Zfp609上有4个与肌肉分化相关的miRNAs,其中miR-615-5p与circRNA-Zfp609具有靶向关系.本研究结果可为与家畜骨骼肌生长发育相关的研究提供参考.

circRNA-Zfp609;C2C12成肌细胞;细胞增殖;细胞分化;miR-615-5p

刘壮;何茹月;曹洋;李村院;张云峰;胡圣伟

省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室,石河子832003;石河子大学生命科学学院,石河子832003

中国畜牧兽医

[1]刘壮;何茹月;曹洋;李村院;张云峰;胡圣伟-.circRNA-Zfp609 对 C2C12 成肌细胞增殖和分化的影响)[J].中国畜牧兽医,2022(12):4535-4544

Zfp609,344g

circRNA,C2C12,成肌细胞,测序分析,骨骼肌,肌组织,脾脏,肺脏,小肠,相对表达量,生成素,MyoG,肌球蛋白重链,MyHC,siRNA,CCK,细胞增殖率,TargetScan,miRDB,软件预测,miRNAs,过表达载体,转染,HEK293T,双荧光素酶,互作关系,野生型,突变型,他组织,细胞分化,NC,细胞的增殖,5p,3p,吸附能力,分子海绵,差异表达,家畜

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