[目的]分析藏绵羊Krüppel样因子7(Krüppel-like factor 7,KLF7)基因表达特征,研究过表达该基因对前脂肪细胞增殖及分化的影响.[方法]从藏绵羊脂肪组织中分离前脂肪细胞进行培养及成脂诱导,应用实时荧光定量PCR技术检测KLF7基因在藏绵羊7个组织(大脑、皮下脂肪、肾脏、背最长肌、瘤胃、睾丸和回肠)和前脂肪细胞不同分化阶段(第0、2、4和8天)的mRNA相对表达水平;应用RT-PCR方法从藏绵羊脂肪组织中扩增KLF7基因CDS区序列,并将其连接到pcDNA3.1(+)真核表达载体获得pcDNA3.1-KLF7过表达质粒,转染前脂肪细胞;应用实时荧光定量PCR方法检测脂肪细胞增殖及分化标志基因mRNA表达水平;采用EdU和CCK-8方法分别检测过表达KLF7基因对EdU阳性细胞数和细胞活力的影响;采用油红0染色检测过表达KLF7基因后脂肪细胞脂滴生成量.[结果]KLF7基因在藏绵羊7个组织中均有表达,其中在大脑中的表达量最高,其次为皮下脂肪和肾脏,均显著高于其他组织(P＜0.05);诱导分化第2、4和8天脂肪细胞mRNA表达量均显著高于分化前(P＜0.05),且分化第2天表达量最高;pcDNA3.1-KLF7过表达质粒转染前脂肪细胞2 d后显著或极显著抑制增殖标志基因CDK4、CyclinB1和CyclinD1的表达水平(P＜0.05;P＜0.01),极显著降低细胞活力及EdU阳性细胞数量(P＜0.01);pcDNA3.1-KLF7过表达质粒转染前脂肪细胞,诱导分化8 d后,脂肪细胞分化标志基因PPARγ、Glut4和ELOVL6的mRNA相对表达水平显著或极显著下调(P＜0.05;P＜0.01),且脂质沉积极显著减少(P＜0.01),表明过表达KLF7基因可抑制藏绵羊前脂肪细胞增殖及分化.[结论]KLF7基因在藏绵羊多个组织中广泛表达,且大脑、皮下脂肪、肾脏中表达量较高;诱导分化后脂肪细胞表达量显著高于分化前,且分化第2天表达量最高;过表达KLF7基因可抑制藏绵羊前脂肪细胞的增殖及分化.试验结果为阐明藏绵羊脂肪沉积的分子调控机制提供了基础数据.

藏绵羊KLF7基因;表达;前脂肪细胞;增殖;分化

张雪萍;石斌刚;金夏阳;王向彦;兰丽娟;时钰;祁有鹏;赵世杰;李少斌;胡江

甘肃农业大学动物科学技术学院,甘肃省草食动物生物技术重点实验室,兰州730070

中国畜牧兽医

[1]张雪萍;石斌刚;金夏阳;王向彦;兰丽娟;时钰;祁有鹏;赵世杰;李少斌;胡江-.藏绵羊KLF7基因表达特征分析及其过表达对前脂肪细胞增殖分化的影响)[J].中国畜牧兽医,2022(08):2920-2930

藏绵羊,KLF7,基因表达特征,前脂肪细胞,脂肪细胞增殖分化,Kr,ppel,like,羊脂,脂肪组织,成脂,皮下脂肪,背最长肌,瘤胃,睾丸,回肠,相对表达,CDS,接到,pcDNA3,真核表达载体,过表达质粒,标志基因,EdU,CCK,阳性细胞,细胞活力,用油,脂滴,生成量,他组织,诱导分化,质粒转染,CDK4,CyclinB1,CyclinD1,细胞数量,脂肪细胞分化,PPAR,Glut4,ELOVL6,脂质沉积,可抑制,脂肪细胞表达,细胞的增殖,脂肪沉积,分子调控机制

0.221798