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阳春砂与海南砂BPPS启动子比较及GCN4-motif正调控作用的鉴定
文献摘要：
目的 龙脑基二磷酸合酶(bornyl diphosphate synthase,BPPS)是砂仁药效萜类合成途径中的关键酶,获得海南砂AlBPPS的启动子并与阳春砂AvBPPS启动子进行调控元件和瞬时表达的比较,以期解析AvBPPS在种子中高表达的分子机制.方法 通过FPNI-PCR的方法从海南砂gDNA中克隆AlBPPS的启动子,并与阳春砂AvBPPS启动子进行序列比较,对启动子相似区域进行截短,获得其相应的截短片段;对AvBPPS启动子截短片段中的GCN4-motif进行突变;构建由上述启动子驱动β-葡萄糖苷酸酶基因(β-glucuro-nidase gene,GUS)的重组表达载体,利用农杆菌介导法注射侵染本氏烟草叶片进行瞬时表达,验证启动子的活性和GCN4-motif的功能.结果 克隆获得365 bp的AlBPPS启动子序列,3,端约300 bp的序列与AvBPPS启动子的相应序列相似度高达93％,但AlBPPS启动子不含有AvBPPS启动子的GCN4-motif.构建成功与GUS报告基因融合的系列启动子重组载体——VBP::GUS(AvBPPS启动子全长)、VBPT::GUS(AvBPPS启动子截短至320 bp)、VBPT-GM::GUS(截短AvBPPS启动子且突变GCN4-motif)和LBP::GUZS(AlBPPS启动子全长)、LBPT::GUS(AlBPPS启动子截短至305 bp).通过GUS染色发现虽然上述启动子均具有驱动GUS基因转录的活性,然而,含有GCN4-motif的启动子,包括全长或截短的AvBPPS启动子(VBP::GUS 和 VBPT::GUS)的活性均高于 GCN4-motif 突变(VBPT-GM::GUS)或无 GCN4-motif 的启动子(LBP::GUS和LBPT::GUS).结论 GCN4-motif对基因转录具有正调控作用,为进一步探究AvBPPS启动子的调控机制奠定了基础.
文献关键词：
启动子;龙脑基二磷酸合酶;阳春砂;海南砂;GCN4-motif;瞬时表达
中图分类号：
作者姓名：
林晓静;梁慧琳;赵海莹;吴清文;黄琳璇;伍思容;杨锦芬
作者机构：
广州中医药大学中药学院中药资源科学与工程研究中心,岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学),国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室,广东广州 510006
文献出处：
引用格式：
[1]林晓静;梁慧琳;赵海莹;吴清文;黄琳璇;伍思容;杨锦芬-.阳春砂与海南砂BPPS启动子比较及GCN4-motif正调控作用的鉴定)[J].中草药,2022(19):6159-6166
A类：
海南砂,BPPS,龙脑基二磷酸合酶,bornyl,AlBPPS,AvBPPS,FPNI,glucuro,nidase,VBP,VBPT,GUZS,LBPT
B类：
阳春砂,GCN4,motif,正调控,diphosphate,synthase,砂仁,药效,萜类合成,合成途径,关键酶,瞬时表达,gDNA,序列比较,短片,糖苷,酶基因,gene,GUS,重组表达,表达载体,农杆菌介导法,侵染,本氏烟草,草叶,bp,启动子序列,报告基因,基因融合,重组载体,全长,GM,基因转录,调控机制
AB值：
0.153923
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