典型文献
灵芝漆酶在黑曲霉中的重组表达及发酵条件优化
文献摘要：
[目的]在黑曲霉(A.niger)中重组表达灵芝L菌漆酶基因,并对其发酵条件进行优化,旨在获得一株高产灵芝漆酶的黑曲霉基因工程菌.[方法]从灵芝L菌克隆漆酶基因Lac-L,并根据黑曲霉密码子偏好性进行优化.选用黑曲霉糖化酶启动子(PglaA)、信号肽及终止子为表达原件,以米曲霉pyrG基因为筛选标记,构建漆酶表达盒,采用聚乙二醇-CaCl2法将其转化至黑曲霉X1(ΔpyrG)原生质体中.对转化子进行PCR验证及固态发酵酶活测定,筛选高产漆酶重组菌株,并对阳性转化子固态发酵培养基碳源、无机与有机氮源比例、Cu2+浓度及发酵时间进行优化.[结果]经尿嘧啶缺陷及含2,2'-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(2,2'-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid ammonium salt),ABTS)培养基筛选获得25株重组漆酶转化子,酶活复筛获得灵芝漆酶异源表达6号重组菌株,发酵72 h酶活可达3 532.6 U/kg,宿主菌株的酶活仅为58.37 U/kg.重组6号菌优化后的最适固态发酵条件为:以麸皮为基础培养基,添加2％麦芽糖、2％(NH4)2SO4、0.25 g/L CuSO4,发酵60 h时重组菌株产漆酶活力最高,达到6 255.47 U/kgo[结论]在黑曲霉中成功实现灵芝L菌漆酶基因Lac-L的异源表达.
文献关键词：
漆酶;黑曲霉;异源表达;发酵条件
中图分类号：
作者姓名：
孙英霞;张铁鹰;安静;郑梦莉
作者机构：
中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,动物营养学国家重点实验室,北京100193;山西农业大学动物科学学院,太谷030801;湖南农业大学动物科学技术学院,畜禽遗传改良湖南省重点实验室,长沙410128
文献出处：
引用格式：
[1]孙英霞;张铁鹰;安静;郑梦莉-.灵芝漆酶在黑曲霉中的重组表达及发酵条件优化)[J].中国畜牧兽医,2022(11):4218-4227
A类：
PglaA,kgo
B类：
灵芝,漆酶,黑曲霉,重组表达,发酵条件优化,niger,酶基因,一株,株高,基因工程菌,Lac,密码子偏好性,糖化酶,启动子,信号肽,终止子,原件,米曲霉,pyrG,筛选标记,建漆,表达盒,聚乙二醇,CaCl2,X1,原生质体,固态发酵,酶活测定,重组菌株,阳性转化子,发酵培养基,碳源,有机氮源,Cu2+,发酵时间,尿嘧啶,乙基,苯并噻唑,铵盐,azinobis,ethylbenzothiazoline,sulfonic,acid,ammonium,salt,ABTS,培养基筛选,株重,酶转化,复筛,异源表达,宿主菌,麸皮,基础培养,麦芽糖,NH4,2SO4,CuSO4,株产,酶活力
AB值：
0.397996
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