目的 从Keap1/Nrf2/HO-1通路角度研究金丝桃苷(Hyp)对H2O2所诱导的小鼠精母细胞(GC-2)氧化损伤的保护作用.方法 将GC-2细胞随机分为正常组、模型组、氮乙酰半胱氨酸组(阳性组,NAC,2.5 mmol/L)以及金丝桃苷组(50、100、200μmol/L),各组按剂量孵育48 h后,除正常组外其余各组细胞加入H2O2(150μmol/L)处理2 h,正常组给予等容量培养基.采用CCK-8法检测细胞的活力,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,酶联免疫法检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、过氧化氢酶(CAT)活力以及丙二醛(MDA)含量,Western blot和RT-qPCR检测Nrf2、Keap1、HO-1蛋白及mRNA的相对表达水平,免疫荧光法检测Nrf2核转位水平.结果 150μmol/L H2O2干预2 h可制备GC-2细胞氧化损伤模型.与正常组比较,模型组GC-2细胞增殖率以及SOD、GSH、CAT活力显著降低,MDA含量、细胞凋亡率,Keap1和Nrf2 mRNA表达显著升高(P<0.05)以及Keap1蛋白表达水平显著升高(P<0.01).与模型组比较,NAC组和金丝桃苷200μmol/L组细胞增殖率和SOD、GSH-PX、CAT活力显著升高,MDA含量、细胞凋亡率显著下降(P<0.05);金丝桃苷200μmol/L组Keap1 mRNA表达显著下降,HO-1 mRNA表达显著升高(P<0.01);金丝桃苷200μmol/L组Nrf2核蛋白(NEs-Nrf2)以及HO-1的蛋白表达显著升高(P<0.05),Keap1蛋白表达显著下降(P<0.01);金丝桃苷组出现了明显的核转位现象(P<0.05).结论 金丝桃苷可能通过激活Keap1/Nrf2/HO-1信号通路,对H2O2诱导的GC-2细胞氧化损伤具有保护作用.

金丝桃苷;氧化应激;Nrf2;HO-1;Keap1;GC-2细胞

朱妍妍;王桐生;戴宁;邓梦云;刘红娟;童小慧;李莉

安徽中医药大学中西医结合学院药理学教研室,安徽 合肥 230012;安徽中医药大学中药复方安徽省重点实验室,安徽 合肥 230012;安徽中医药大学第一附属医院男科,安徽 合肥 230601

南方医科大学学报

[1]朱妍妍;王桐生;戴宁;邓梦云;刘红娟;童小慧;李莉-.金丝桃苷通过激活Keap1/Nrf2/HO-1通路保护小鼠GC-2细胞的氧化损伤)[J].南方医科大学学报,2022(05):673-680

NEs

金丝桃苷,Keap1,Nrf2,HO,Hyp,H2O2,小鼠精母细胞,乙酰半胱氨酸,NAC,孵育,CCK,流式细胞仪,酶联免疫法,谷胱甘肽过氧化物酶,GSH,PX,过氧化氢酶,CAT,blot,qPCR,白及,相对表达,免疫荧光法,核转位,细胞氧化损伤,损伤模型,细胞增殖率,细胞凋亡率,蛋白表达水平,核蛋白

0.176824