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SARS-CoV-2非结构蛋白兔抗血清的制备及其在灭活疫苗质量监控中的应用
文献摘要：
目的 制备SARS-CoV-2非结构蛋白1(non-structure protein 1,NSP1)兔抗血清,并用其检测SARS-CoV-2 NSP1在灭活疫苗生产过程中的含量变化,为建立灭活疫苗纯度、工艺质量监控方法奠定基础.方法 选择带DE3的E.coli原核表达系统表达SARS-CoV-2 NSP1全长蛋白,纯化后免疫日本大耳白兔,共免疫6次,每次间隔14 d,采集全血,获得NSP1兔抗血清;以纯化的NSP1蛋白为抗原,Western blot法鉴定兔抗血清纯度,同时利用RD细胞表达NSP1-eGFP融合蛋白,裂解后作为抗原对NSP1兔抗血清进行特异性鉴定;以SARS-CoV-2灭活疫苗生产过程中1～4 d细胞裂解液及纯化后病毒颗粒为抗原,NSP1兔抗血清及M、S、E、N兔抗血清为一抗,Western blot法鉴定样品中抗原蛋白的含量变化.结果 成功表达带有GST标签的NSP1蛋白,并获得相应的兔抗血清,且抗原纯度较高;制备的兔抗血清能正确识别真核表达的NSP1-eGFP融合蛋白,并能鉴定灭活疫苗生产过程中蛋白含量的变化;灭活疫苗成品中不含NSP,疫苗纯度高;E蛋白与其他3种主要结构蛋白M、S、N的表达时相不同,早期表达晚期下降.结论 制备的NSP1兔抗血清可用于NSP1和E蛋白功能的研究,以及灭活疫苗生产过程中纯度和质量的监控.
文献关键词：
SARS-CoV-2;非结构蛋白1;兔抗血清;灭活疫苗;质量控制
中图分类号：
作者姓名：
汪梦俊;安欢欢;田宇璇;刘睿伦;张小宇;吴杰;郭靖;申硕
作者机构：
武汉生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗研究一室,湖北武汉430207
文献出处：
引用格式：
[1]汪梦俊;安欢欢;田宇璇;刘睿伦;张小宇;吴杰;郭靖;申硕-.SARS-CoV-2非结构蛋白兔抗血清的制备及其在灭活疫苗质量监控中的应用)[J].中国生物制品学杂志,2022(09):1034-1039,1044
A类：
表达时相
B类：
SARS,CoV,非结构蛋白,兔抗血清,灭活疫苗,苗质,质量监控,structure,protein,NSP1,疫苗生产,含量变化,工艺质量,DE3,coli,原核表达,表达系统,全长,日本大耳白兔,全血,blot,清纯,RD,eGFP,融合蛋白,特异性鉴定,病毒颗,抗原蛋白,GST,真核表达,蛋白含量,主要结构,蛋白功能
AB值：
0.195629
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