目的 构建新型冠状病毒(SARS-CoV-2)假病毒,优化假病毒制备条件并应用于中和抗体活性检测.方法 优化合成SARS-CoV-2刺突蛋白(S)基因,进行假病毒包装;通过Western blot检测S基因的表达;应用定量ELI-SA检测接种新冠灭活疫苗后血清中新型冠状病毒IgG抗体的滴度,同时应用假病毒中和实验对接种新冠疫苗后血清中和抗体活性进行评价.结果 成功构建了整合SARS-CoV-2 S基因的表达载体pcDNA3.1-S,确定pNL4-3.Luc.R-E-:pcDNA3.1-S最佳转染比例为2:1,可成功包装出高滴度的假病毒粒子.Western blot结果表明S蛋白已成功地在假病毒中进行表达.SARS-CoV-2假病毒可感染Vero、Huh7.5、A549-hACE2和293T-hACE2等4种靶细胞,表明所构建的假病毒具有感染活力,且具有广泛的宿主范围,其中293T-hACE2细胞感染假病毒后相对其他细胞株可检测出更高的萤火虫荧光素酶活性.ELISA检测接种新冠疫苗后收集的血清,结果表明接种第二针灭活疫苗一周后可检测出较高血清IgG滴度(S/CO=10.27±3.33),半年后血清IgG滴度降低(S/CO=2.36±2.25);假病毒中和实验结果表明1例IgG阳性(S/CO=10.32)免疫后血清可有效抑制SARS-CoV-2假病毒的感染活力,中和效价达到1/1 066.结论 成功构建SARS-CoV-2假病毒,该假病毒可用于后续有关SARS-CoV-2中和抗体活性检测和疫苗接种后体液免疫效果的评价研究.

新型冠状病毒;假病毒;刺突蛋白;中和抗体;疫苗接种

梁婉欣;刘淑燕;段炼;周雪峰;邬林枫;刘文齐;张更伟;朱华晨;张国良

汕头大学医学院粤港新发传染病联合实验室,教育部病毒学与新发传染病国际合作联合实验室,广东汕头515041;深圳市第三人民医院肝病研究所,广东深圳518116;广东医科大学,广东东莞523808;香港大学新发传染性疾病国家重点实验室,香港999077

中国热带医学

[1]梁婉欣;刘淑燕;段炼;周雪峰;邬林枫;刘文齐;张更伟;朱华晨;张国良-.新型冠状病毒假病毒的构建及其在血清中和抗体测定中的应用)[J].中国热带医学,2022(03):240-245

pNL4

假病毒,中和抗体,体测,SARS,CoV,制备条件,活性检测,优化合成,刺突蛋白,病毒包装,blot,新冠灭活疫苗,IgG,滴度,新冠疫苗,表达载体,pcDNA3,Luc,转染,装出,Vero,Huh7,A549,hACE2,293T,靶细胞,有感,宿主,细胞感染,细胞株,萤火虫,荧光素酶活性,一周,中和效价,疫苗接种,后体,体液免疫,免疫效果

0.260905