典型文献
一株产高酶活性碱性磷酸酶解淀粉芽孢杆菌的分离及其phoD碱性磷酸酶基因的克隆与表达
文献摘要：
[背景]碱性磷酸酶作为工具酶被广泛应用于各个领域,在免疫学检测方面应用较多的是PhoA家族的碱性磷酸酶,尚无关于PhoD家族的碱性磷酸酶在免疫学检测方面的研究.[目的]筛选出一株产高酶活性PhoD家族碱性磷酸酶的细菌,并将其phoD基因进行克隆表达,研究PhoD的酶学性质,为PhoD家族的碱性磷酸酶在免疫学检测方面的应用奠定一定的基础.[方法]采取有机质丰富的土样在有机磷平板中进行细菌分离,以4-硝基苯磷酸二钠盐(4-nitrophenyl phosphate disodium salt hexahydrate,p-NPP)为底物测定有机磷平板中单菌落的酶活性,选取酶活性高的菌株作为目的菌株,克隆其phoD基因.[结果]筛选到一株产碱性磷酸酶酶活性高的菌株S2-4,通过16S rRNA基因序列同源性比较分析,鉴定该菌株为解淀粉芽孢杆菌,克隆了其phoD基因并进行诱导表达.研究了纯化后PhoD的酶学性质,PhoD的最适反应温度为70℃;最适反应pH为9.8;PhoD最适Ca2+浓度为3 mmol/L,Mg2+对PhoD的酶活性有抑制作用,K+、Zn2+、Mn2+和Fe2+对PhoD的酶活性没有明显影响;以p-NPP为底物,在25℃下测得PhoD的Km为5.94 mmol/L,Vmax为31.46 μmol/(L·min),kcat值为103.59 s-1,为大肠杆菌碱性磷酸酶EAP kcat值的1.60倍.[结论]菌株S2-4能产高酶活性的碱性磷酸酶,其含有的PhoD为单体酶,催化效率高于EAP,是比EAP具有更大优势的标记酶.
文献关键词：
碱性磷酸酶;筛选;解淀粉芽孢杆菌;phoD;酶学性质
中图分类号：
作者姓名：
熊梦霞;廖华媛;郑金;何景锋;曹锟;余兴龙
作者机构：
湖南农业大学动物医学院,湖南长沙410128;湖南康保特生物科技有限公司,湖南长沙410128
文献出处：
引用格式：
[1]熊梦霞;廖华媛;郑金;何景锋;曹锟;余兴龙-.一株产高酶活性碱性磷酸酶解淀粉芽孢杆菌的分离及其phoD碱性磷酸酶基因的克隆与表达)[J].微生物学通报,2022(02):505-513
A类：
PhoA,PhoD,hexahydrate
B类：
一株,株产,酶解,解淀粉芽孢杆菌,phoD,碱性磷酸酶基因,克隆与表达,工具酶,免疫学检测,克隆表达,酶学性质,有机质,有机磷,细菌分离,硝基苯,钠盐,nitrophenyl,phosphate,disodium,salt,NPP,底物,单菌,菌落,S2,16S,rRNA,基因序列,序列同源性,同源性比较,诱导表达,反应温度,Ca2+,Mg2+,K+,Zn2+,Mn2+,Fe2+,Km,Vmax,kcat,大肠杆菌,EAP,催化效率
AB值：
0.269758
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