典型文献
鸟肠球菌(Enterococcus avium)中α-L-鼠李糖苷酶基因的克隆表达及酶学性质
文献摘要：
[背景]前期工作中筛选出一株产α-L-鼠李糖苷酶的细菌,经分子生物学方法鉴定为鸟肠球菌(Enterococcus avium).α-L-鼠李糖苷酶能够从天然类黄酮化合物中特异性切割末端鼠李糖,在食品生产、医药加工和化工等方面具有极大的开发前景和应用价值.[目的]克隆、表达鸟肠球菌中α-L-鼠李糖苷酶基因,进一步对重组蛋白的酶学性质进行研究.[方法]以鸟肠球菌(Enterococcus avium) strain 352基因组中推定的α-L-鼠李糖苷酶基因序列为基础,设计特异性引物扩增其编码区序列.以pET-28a(+)为载体构建重组表达质粒,将重组蛋白在Escherichia coli BL21 (DE3)感受态细胞中进行诱导表达.使用镍亲和层析纯化重组蛋白,以pNPR为底物测定重组蛋白的酶学性质.[结果]重组蛋白EaRha1分子量大小约为130 kDa.以pNPR为底物,EaRha1最适pH是7.0,最适温度为50℃,在pH 5.0-8.0稳定性较好,在40℃以下能保持较高酶活.金属离子对EaRha1有不同程度的促进或抑制作用.甲醇对EaRha1有抑制作用,并且抑制作用随着甲醇浓度的增大而增强.酶动力学常数Km和Vmax分别为0.35 mmol/L和4.2 μmol/(mg·min) (R2=0.999).EaRha1能催化水解新橙皮苷、柚皮苷和芦丁.[结论]通过对重组蛋白EaRha1酶学性质的研究,确定了该蛋白对黄酮类化合物的水解特性,为黄酮类化合物的生物转化奠定了理论基础.
文献关键词：
α-L-鼠李糖苷酶;基因克隆;蛋白表达;酶学性质
中图分类号：
作者姓名：
郑鼎玉;陈婕;郑紫云;卢丹丹;杨官娥
作者机构：
山西医科大学药学院,山西太原030001
文献出处：
引用格式：
[1]郑鼎玉;陈婕;郑紫云;卢丹丹;杨官娥-.鸟肠球菌(Enterococcus avium)中α-L-鼠李糖苷酶基因的克隆表达及酶学性质)[J].微生物学通报,2022(01):49-60
A类：
pNPR,EaRha1
B类：
肠球菌,Enterococcus,avium,鼠李糖,糖苷酶,酶基因,克隆表达,酶学性质,前期工作,一株,株产,分子生物学方法,类黄酮,黄酮化合物,食品生产,开发前景,重组蛋白,strain,推定,基因序列,特异性引物扩增,编码区,pET,28a,载体构建,重组表达,质粒,Escherichia,coli,BL21,DE3,感受态,诱导表达,亲和层析,层析纯化,底物,分子量,kDa,金属离子,离子对,酶动力学,动力学常数,Km,Vmax,催化水解,新橙皮苷,柚皮苷,芦丁,质的研究,黄酮类化合物,水解特性,生物转化,基因克隆
AB值：
0.329809
相似文献
机标中图分类号，由域田数据科技根据网络公开资料自动分析生成，仅供学习研究参考。
