为探究Toll样受体2/4(TLR2/4)、核苷酸结合寡聚结构域样受体1/2(NOD1/2)在产肠毒素大肠杆菌(ETEC)诱导的猪肠道上皮细胞(IPEC-J2)炎症反应中的作用,本研究以不同MOI(0.1、0.02、0.01)的ETEC感染IPEC-J2,2h后,采用MTT法检测IPEC-J2的细胞活力,以筛选ETEC感染IPEC-J2的最适MOI.结果显示,经MOI 0.01的ETEC感染后IPEC-J2的细胞活力极显著低于对照组(P＜0.001).因此,采用最适MOI 0.01的ETEC感染IPEC-J2,分别培养不同时间后,采用荧光定量PCR(qPCR)检测ETEC感染IPEC-J2中的TLR2/4、NOD1/2及促炎性细胞因子IL-6、IL-8、肿瘤细胞坏死因子(TNF-α)mRNA的转录水平;利用TLR2/4混合抑制剂AMG9810及NOD 1/2混合抑制剂NOD-IN-1分别与IPEC-J2共作用6 h,再经ETEC感染2 h后经qPCR检测TLR2/4、NOD 1/2及下游促炎性细胞因子IL-6、IL-8、TNF-αmRNA的转录水平.qPCR结果显示,与对照组相比,ETEC感染的IPEC-J2中TLR2 mRNA转录水平(感染后30 min及120 min)及TLR4 mRNA转录水平(感染后105 min及120 min)均极显著升高(P＜0.01、P＜0.001),其余时间段与对照组无显著差异;IPEC-J2 NOD1 mRNA转录水平(感染60min及以后)、NOD2mRNA转录水平(感染后30min～120min)均极显著高于对照组(P＜0.01、P＜0.001),且IL-6、IL-8(感染后30 min除外)、TNF-α mRNA的转录水平随感染时间延长均极显著升高(P＜0.01).与不加抑制剂的感染组相比,经两种受体抑制剂作用后再感染ETEC的IPEC-J2中TLR2/4、NOD 1/2 mRNA的转录水平均显著(P＜0.05)或极显著(P＜0.01)下降;且其中的IL-6、IL-8、TNF-α mRNA的转录水平均极显著降低(P＜0.01).上述结果首次表明,ETEC感染可通过激活IPEC-J2受体TLR2/4、NOD1/2进而诱导下游促炎性细胞因子IL-6、IL-8、TNF-αmRNA转录水平的升高.本研究为阐释ETEC诱导猪肠道炎症反应的致病机制提供了参考依据.

产肠毒素大肠杆菌;猪肠道上皮细胞;TLR2、TLR4;NODI、NOD2;炎性细胞因子

西南大学动物医学院,重庆 北碚400715;浙江大学动物科学学院,浙江 杭州310030

[1]李雪滢;韩阳春;黄静;李霞;曾聪;肖乐;刘峻源;曾雯玉;彭远义;王自力-.TLR2/4、NOD1/2受体在ETEC感染猪肠道上皮细胞炎性反应中作用的研究)[J].中国预防兽医学报,2022(07):750-756

AMG9810,NOD2mRNA,NODI

TLR2,NOD1,ETEC,猪肠道上皮细胞,炎性反应,Toll,样受体,寡聚,聚结,结构域,产肠毒素大肠杆菌,IPEC,J2,MOI,2h,MTT,细胞活力,qPCR,促炎性细胞因子,肿瘤细胞,细胞坏死,转录水平,IN,共作,再经,TLR4,60min,30min,120min,除外,随感,不加,再感染,肠道炎症反应,致病机制

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