目的 确定并验证以细胞表面标志物CD54作为评价指标的光致敏体外评价方法.方法 将THP-1细胞与多种光致敏剂、光刺激剂、皮肤致敏剂、皮肤刺激剂和阴性受试物分别孵育,在光照射或避光处理后,用流式细胞仪测定细胞表面标志物CD54和CD86的表达水平并统计分析,进一步确定具体的评价指标,并对该方法的准确性、特异性、灵敏度、重复性进行验证.结果 19种光致敏剂中有15种引起照射组THP-1细胞表达CD54的平均荧光强度(MFI)较非照射组显著增加(P＜0.05、0.01),且照射组细胞表达CD54的相对荧光强度(RFI)值均在1.5以上.光刺激剂经光照射后也可引起细胞表达CD54的MFI显著增加(P＜0.01),但经过预照射处理后,CD54的表达水平较直接照射组显著下降(P＜0.01).未经光照射条件下,皮肤致敏剂即可引起THP-1细胞表达CD54和CD86的MFI比对照组显著增加(P＜0.01),光照后CD54的表达反而略有下降.在光照和避光条件下,皮肤刺激剂、阴性受试物(乳酸)均未引起细胞表达CD54或CD86的显著性变化.以CD54为评价指标的THP-1细胞光致敏评价方法检测光致敏剂的准确性、特异性和灵敏度分别是85.2％、100％和78.9％,具有良好的重复性.结论 确定了THP-1细胞光致敏评价方法的细胞表面标志物评价指标为CD54,判定标准为:(1)光照后THP-1细胞表达CD54的MFI较照射前显著性增加;(2)光照后THP-1细胞表达CD54的RFI≥1.5;(3)当上述条件均满足时,对受试物进行预照射处理,结果仍然满足前2条标准.

光致敏;THP-1细胞;CD54;CD86;平均荧光强度;相对荧光强度;方法学验证

董建欣;黄舒佳;王宇;姜华;赵华琛;祝清芬;刘丽;李波

山东省食品药品检验研究院国家药品监督管理局仿制药研究与评价重点实验室,山东济南250101;中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心,药物非临床安全评价研究北京市重点实验室,北京100176;国家药品监督管理局药品审评中心,北京 100022

药物评价研究

[1]董建欣;黄舒佳;王宇;姜华;赵华琛;祝清芬;刘丽;李波-.以CD54为评价指标的THP-1细胞光致敏体外评价方法的确定和验证)[J].药物评价研究,2022(01):20-29

光致敏

CD54,THP,体外评价方法,细胞表面,表面标志物,光刺激,刺激剂,皮肤致敏,皮肤刺激,孵育,避光,光处理,流式细胞仪,CD86,平均荧光强度,MFI,相对荧光强度,RFI,显著性变化,测光,判定标准,当上,方法学验证

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