目的:探讨miR145-5p过表达对类风湿性关节炎(RA)患者滑膜巨噬细胞极化失衡的影响.方法:取对数生长期的人单核细胞(THP-1)诱导为成M1型巨噬细胞,将RA滑膜成纤维细胞M1型巨噬细胞与共培养成滑膜巨噬细胞.滑膜巨噬细胞分为4组:RA组(空白组)、TGF-β1组(模型组)、miR145-5p过表达组(TGF-β1+miR145-5p mimics组)、miR145-5p过表达阴性对照组(TGF-β1+miR145-5p-mimics-NC组).空白组不做任何处理,其余3组均在培养基中TGF-β1处理诱导48 h.转染miR145-5p-mimic和miR145-5p-mimics-NC至共培养基中,ELISA法检测滑膜巨噬细胞IL-6、CD163表达.RT-qPCR检测miRNA145-5p、TGF-β1mRNA、Smad3mRNA、Smad7mRNA表达水平.WB免疫印迹法检测TGF-β1/Smads通路相关蛋白表达.结果:与空白组比较,模型组IL-6水平上调(P<0.01),CD163水平下调(P<0.05),提示TGF-β1可诱导加剧免疫炎症反应;与miR145-5p过表达阴性对照组、模型组相比,ELISA法显示miR145-5p过表达组抑炎分子CD163明显升高(P<0.01),致炎因子IL-6表达降低(P<0.05);PCR显示miR145-5p过表达组miR145-5p mRNA表达水平明显升高,Smad3 mRNA、TGF-β1 mRNA明显降低,Smad7 mRNA明显升高(P<0.01);WB法显示miR145-5p过表达组抑炎蛋白Smad7明显升高,TGF-β1、Smad3蛋白明显降低(P<0.01);transwell小室结果证实miR145-5p过表达组显著减少巨噬细胞侵袭(P<0.01);相关性分析显示miR145-5p与Smad3负相关,与Smad7呈正相关(P<0.01).结论:miR145-5p可能通过靶向抑制Smad3蛋白,负反馈调控TGF-β1/Smads通路,抑制RA患者巨噬细胞极化,缓解免疫炎症反应.

类风湿性关节炎;miR145-5p;TGF-β1/Smads通路;巨噬细胞极化;体外实验

安徽中医药大学研究生院,安徽 合肥230038;安徽中医药大学第一附属医院风湿科,安徽 合肥 230031

[1]王晴晴;谌曦;万磊;范海霞;刘天阳;李明;刘磊;葛瑶;范文杰;费陈晨;周倩-.基于miR145-5p负反馈调控TGF-β1/Smads通路抑制巨噬细胞极化的实验研究)[J].海南医学院学报,2022(23):1803-1809

1+miR145,miRNA145,Smad3mRNA

5p,负反馈,反馈调控,TGF,Smads,巨噬细胞极化,过表达,类风湿性关节炎,RA,滑膜巨噬细胞,对数生长期,人单核细胞,THP,M1,滑膜成纤维细胞,共培养,mimics,NC,转染,CD163,qPCR,1mRNA,Smad7mRNA,WB,免疫印迹法,免疫炎症反应,法显,致炎因子,transwell,小室,细胞侵袭,靶向抑制,体外实验

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