目的 构建高糖环境下缺氧复氧损伤小鼠海马神经元HT22细胞模型,探讨褪黑素(melatonin,Mel)调控自噬对高糖环境下HT22细胞缺氧复氧损伤的影响.方法 小鼠海马神经元HT22细胞分为高糖组、高糖缺氧复氧组、高糖缺氧复氧+Mel组、高糖缺氧复氧+Mel+3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)组.高糖组于高糖培养基、常氧环境中培养,建立高糖模型;高糖缺氧复氧组在建立高糖模型后,进行细胞周期同步化处理,无糖无血清培养基、低氧环境中培养6 h,高糖培养基、常氧环境中培养24 h,建立缺氧复氧模型;高糖缺氧复氧+Mel组和高糖缺氧复氧+Mel+3-MA组在建立高糖模型、细胞周期同步化处理后,分别加入100 μmol/L Mel、100 μmol/L Mel+5 mmol/L 3-MA,于高糖培养基、常氧环境中预培养4 h,再建立缺氧复氧模型.造模后取4组细胞,采用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,DCFH-DA荧光探针检测活性氧水平,TBA法检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平,WST-1法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平,Western blot 法检测微管相关蛋白 1 轻链 3(microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3)Ⅰ、LC3Ⅱ、Beclin1、自噬相关蛋白14(autophagy related 14,Atg14)蛋白相对表达量并计算LC3 Ⅱ/Ⅰ.结果 高糖缺氧复氧组细胞活力(0.37±0.14)、SOD 水平[(51.88±11.76)u/mg]、LC3Ⅱ/Ⅰ(0.35±0.16)及 Beclin1(0.31±0.15),Atg14(0.32±0.16)蛋白相对表达量均低于高糖组[1.00±0.09、(151.54±24.25)u/mg、1.00±0.14、1.00±0.13、1.00±0.11](P＜0.05),细胞凋亡率[(28.26±5.37)％]、活性氧(5.38±0.85)、MDA[(20.77±3.58)nmol/mg]水平均高于高糖组[(7.83±2.35)％、1.01±0.69、(6.13±1.40)nmol/mg](P＜0.05);高糖缺氧复氧+Mel 组细胞活力(0.79±0.13)、SOD 水平[(112.60±17.69)u/mg]、LC3 Ⅱ/Ⅰ(0.69±0.16)及 Beclin1(0.75±0.12)、Atg14(0.74±0.14)蛋白相对表达量均高于高糖缺氧复氧组(P＜0.05),细胞凋亡率[(15.16±3.23)％]、活性氧(2.69±0.92)、MDA水平[(10.33±2.18)nmol/mg]均低于高糖缺氧复氧组(P＜0.05);高糖缺氧复氧+Mel+3-MA 组细胞活力(0.43±0.11)、SOD 水平[(73.92±17.23)u/mg]、LC3 Ⅱ/Ⅰ(0.39±0.15)及 Beclin1(0.41±0.14)、Atg14(0.41±0.15)蛋白相对表达量均低于高糖缺氧复氧+Mel组(P＜0.05),细胞凋亡率[(22.85±4.36)％]、活性氧(4.72±1.02)、MDA 水平[(16.05±1.98)nmol/mg]均高于高糖缺氧复氧+Mel 组(P＜0.05).结论 Mel可通过增强自噬、抑制氧化应激和细胞凋亡,减轻高糖环境下小鼠海马神经元HT22细胞缺氧复氧损伤,发挥神经保护作用.

缺氧复氧损伤;褪黑素;自噬;高糖;HT22细胞;小鼠

李冰玉;刘恋;侯家保;吴洋;赵博;夏中元

武汉大学人民医院麻醉科,湖北武汉 430060

中华实用诊断与治疗杂志

[1]李冰玉;刘恋;侯家保;吴洋;赵博;夏中元-.褪黑素调控自噬对高糖环境下HT22细胞缺氧复氧损伤的影响)[J].中华实用诊断与治疗杂志,2022(09):884-888

+Mel,+Mel+3,细胞周期同步化,Mel+5

褪黑素,高糖环境,HT22,缺氧复氧损伤,小鼠海马神经元,细胞模型,melatonin,腺嘌呤,methyladenine,MA,常氧,无糖,无血清培养基,低氧环境,别加,预培养,CCK,细胞活力,流式细胞术,细胞凋亡率,DCFH,荧光探针,活性氧水平,TBA,malondialdehyde,WST,superoxide,dismutase,blot,微管,轻链,microtubule,associated,protein,light,chain,LC3,Beclin1,自噬相关蛋白,autophagy,related,Atg14,白相,相对表达量,nmol,抑制氧化,神经保护作用

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